manbet手机版童年

manbet手机版我manbet手机版1948年出生于澳大利亚塔斯马尼亚州的小城市霍巴特。manbet手机版我的父母是家庭医生。manbet手机版我的祖父和曾祖父都是地质学家。manbet手机版我父亲那边的曾祖父，在作为英国国教会的牧师来到澳大利亚之前，曾在夏威夷住过一段时间，在那里他收集鞘翅目昆虫(甲虫)。manbet手机版他在澳大利亚继续他的收藏，最终把他的收藏卖给了英国自然历史博物馆。manbet手机版我的叔叔和婶婶(我父亲的姐姐和母亲的哥哥)也都是家庭医生，他们搬到英国，在那里结婚，并永久定居在那里行医，养家糊口。

manbet手机版我是七个兄弟姐妹中的老二。manbet手机版我在霍巴特附近的海边小镇斯纳格度过了人生的头4年。manbet手机版出于对动物的好奇，我会在后院捡蚂蚁，在海滩上捡水母。manbet手机版后来我们家搬到了塔斯马尼亚北部的朗塞斯顿。manbet手机版我们的第一所房子在阿伯特街120号，是一幢有阳台的平房，是典型的澳大利亚郊区建筑。manbet手机版我在一所女子学校——朗塞斯顿的布罗德兰·豪斯女子文法学校(图1)上了幼儿园。

manbet手机版我把蝌蚪养在家里后客厅里很快就会变臭的玻璃罐里。manbet手机版当我不到十岁的时候，我们搬到了一个更大的叫做Elphin house的房子里，那里有一个很大的花园(图2)。manbet手机版有一次，我列举了当时家里的动物饲养场:花园一角的鸟舍里养着虎皮鹦鹉和金丝雀，花园池塘里养着金鱼，鸡舍和鸡舍里养着鸡和小公鸡(用来孵蛋，偶尔还能吃烤鸡)，笼子里养着兔子和豚鼠，还有猫和一只狗，它们住在房子和花园的各个角落。manbet手机版我喜欢所有这些动物，也喜欢动物和大自然。

manbet手机版也许是由于对动物的迷恋，生物学似乎是我小时候最感兴趣的科学。manbet手机版我被为年轻人编写的科学书籍所带来的科学视觉冲击所吸引，也被科学探索的浪漫和崇高所吸引。manbet手机版后者是由玛丽·居里的女儿所写的传记而产生的，我小时候反复阅读了这本传记。manbet手机版在我快30岁的时候，我很清楚自己想从事科学研究。manbet手机版我在布罗德兰女子文法学校接受了良好的教育。manbet手机版然而，学校没有开设物理课程，所以我在当地的公立高中上了晚上开设的物理课程。manbet手机版我的女校也没有教过拉丁语和希腊语，这是我在教育上的一个空白，我后来很后悔。manbet手机版但是我的学校确实提供了一位优秀的钢琴老师，海伦·罗克斯堡，我在朗塞斯顿的求学生涯都是拜她为师。manbet手机版我喜欢弹钢琴，甚至一度渴望成为一名音乐家。manbet手机版幸运的是，我对这一点也很现实，因为我认识到我在钢琴弹奏方面不是很有天赋，而是很有能力，所以我选择了科学方向。

manbet手机版在经历了一些家庭混乱之后，我们全家搬到了澳大利亚墨尔本市，正好赶上我在大学高中完成高中最后一年的学业。manbet手机版在那里，我获得了申请墨尔本大学理科本科学位所需的信心。

manbet手机版大学教育

manbet手机版我选择了生物化学作为我的专业，并在四年后以生物化学荣誉学位毕业。manbet手机版在那段时间里，我开始喜欢上了生物化学研究，尽管我刚刚开始接触实验室研究。

manbet手机版后来，生物化学系主任弗兰克·赫德给我提供了一个在他的研究实验室做硕士研究生的职位，他们在那里研究氨基酸代谢的生物化学。manbet手机版我的本科荣誉论文研究导师Theo Dopheide和已故的Barrie Davidson曾建议并鼓励我出国攻读博士学位。manbet手机版巴利特别鼓励我考虑去英国剑桥的MRC分子生物学实验室(LMB)，他在那里做博士后研究。manbet手机版但为了被剑桥大学录取为生物学博士生，来自英国以外的学生必须完成一年的研究。manbet手机版Frank Hird的硕士学位，研究大鼠肝脏中的谷氨酰胺代谢，将构成这一年的必修课程。manbet手机版弗兰克·希尔德(Frank Hird)教导他的实验室小组成员研究的乐趣和美学。manbet手机版他说，他认为每个实验都应该具有莫扎特奏鸣曲那样的美丽和简单。manbet手机版他的实验室团队在他强烈的个性支配下，很有凝聚力，我们有时会开车去墨尔本郊外的山区，所有人都挤在他的车里，车上的收音机里放着莫扎特的音乐，我们在树木和野花之间进行户外午餐野餐。manbet手机版当我还在弗兰克·赫德的实验室时，manbet手机版弗雷德·桑格manbet手机版参观了墨尔本。manbet手机版第二次世界大战后不久，弗兰克·希尔德在英国与弗雷德·桑格一起做了一项关于氨基酸的研究，介绍了弗雷德，弗兰克鼓励我告诉弗雷德我希望在剑桥大学的LMB攻读博士学位。manbet手机版按照安排，我将加入弗雷德在LMB的实验室，并被剑桥大学录取为博士生。

manbet手机版离开家和家人去英国的冒险是一个巨大的一步，但我觉得我已经准备好了。manbet手机版我的叔叔和婶婶一家住在剑桥，离LMB很近，他们成了我离家在外的家庭的支柱。manbet手机版我喜欢LMB，喜欢那里正在进行的科学研究，喜欢分子生物学中心的氛围，喜欢科学家们的热情和对科学的不断讨论。manbet手机版这是一个完全沉浸的世界。manbet手机版在我的博士论文研究中，我对噬菌体phiX 174(一种小型单链DNA噬菌体)的区域进行了测序。manbet手机版我将噬菌体DNA片段转录成RNA，然后使用弗雷德开创的拼接RNA序列的方法。manbet手机版我们将这种方法得到的序列与Fred实验室成员John Sedat, Ed Ziff和Francis Galibert所做的DNA测序相结合。manbet手机版所有的序列都是一致的。manbet手机版这个微小的噬菌体DNA基因组的48个核苷酸片段的第一个序列是非常令人兴奋的。manbet手机版我拿着它给当时12岁左右的剑桥表弟看，他在数学方面很有天赋，我想看看他擅长数学的眼睛是否能看出什么规律。 He pointed out the repeats, but it was premature to think of analyzing DNA sequence patterns!

manbet手机版去美国

manbet手机版发现DNA序列的世界正在打开，我被它的可能性迷住了。manbet手机版从1975年开始，我就计划和霍华德·古德曼以及他在加州大学旧金山分校的亲密伙伴赫伯·博耶尔一起做博士后研究，这是我和赫伯在比利时一所修道院的花园里散步时进行的一次采访和交谈后共同做出的决定，当时我们正在那里参加一个科学会议，我还是一个研究生。manbet手机版但后来爱情出现了:约翰·塞达特和我决定结婚，而约翰要去耶鲁大学，我决定看看能否把我的博士后研究计划(为此我获得了安娜·富勒奖学金，可以在加州大学旧金山分校工作)改为耶鲁大学的一个实验室。manbet手机版在我向霍华德·古德曼告知我改变计划的原因后，他给我写了一封亲切而理解的信，我开始调查在耶鲁大学进行博士后培训的实验室的可能性。

manbet手机版因此，正是这份爱让我做出了一个最幸运、最具影响力的选择:耶鲁大学乔·加尔的实验室。manbet手机版由于国际邮件错位和其他因素，在经历了几次困难之后，1975年初，乔接受了我作为他实验室的博士后，我被允许转移安娜·富勒奖学金。manbet手机版我立即开始寻找方法来完成DNA的测序，这些DNA是在Joe和他的同事，以及丹麦的Jan Engberg在纤毛原生动物的体细胞核中发现的，在大量的，短的，线性核糖体基因携带“小染色体”的末端区域发现的manbet手机版四膜虫manbet手机版嗜热性(当时被称为manbet手机版四膜虫pyriformismanbet手机版不久之后，它被重新命名manbet手机版四膜虫thermophilamanbet手机版）.

manbet手机版加利福尼亚大学

manbet手机版1977年底，在乔·加尔的实验室完成博士后培训后，我和约翰·塞达特(John Sedat)于1975年结婚，搬到了加利福尼亚州的旧金山。manbet手机版在那里，约翰接受了加州大学旧金山分校(UCSF)助理教授的职位。manbet手机版我申请了多所大学的助理教授职位，但都被拒绝了，这是一段令人沮丧的经历。manbet手机版我曾申请过加州大学伯克利分校分子生物学系的一个这样的职位，但还没有听到我是否在竞争。manbet手机版与此同时，加州大学旧金山分校为我提供了一个由Herb Boyer领导的生物化学系遗传学部门的研究轨道职位和空间。manbet手机版我的第一笔NIH拨款是我工资和研究费用的来源。manbet手机版在加州大学旧金山分校的鼓励下，我写了这份拨款申请，以从事我的研究manbet手机版四膜虫manbet手机版端粒及其相关蛋白质。manbet手机版这项工作源于我在耶鲁大学乔·加尔实验室所做的工作。manbet手机版我的经费是由国立卫生研究院普通医学研究所提供的。manbet手机版由于不确定能否获得资助，我向美国国立卫生研究院、美国国家科学基金会和美国癌症协会提交了同样的拨款申请，希望从其中任何一个机构获得资助。manbet手机版反映了当时基础科学界非正式的科学习惯，一段时间后，一位拨款审查员告诉我，他对我的自动放射影像照片非常感兴趣，显示端粒DNA在manbet手机版四膜虫manbet手机版被神秘地包装成核小体以外的东西，他一直保存着这张照片。

manbet手机版后来加州大学伯克利分校给了我一个分子生物系的副教授职位，我马上就接受了。manbet手机版再一次，我把资金从加州大学旧金山分校转到了我自己的实验室，在加州大学伯克利分校。

manbet手机版因为研究过去是，现在仍然是我生活的中心部分，如果不描述我的研究经历，我的自传就不完整。manbet手机版因此，为了表达它们的更全面的味道，我在这里描述了我早期关于染色体末端分子性质的科学研究的一些事件。

manbet手机版真核生物染色体末端DNA的早期研究

manbet手机版1975年初到耶鲁大学乔·加尔的实验室后不久，我就开始应用获取末端DNA序列的方法manbet手机版四膜虫manbet手机版rDNA分子。manbet手机版我在英国剑桥的弗雷德·桑格的实验室里学到了一套方法，当时我刚刚在那里完成了博士学位。我渴望对这些小染色体的末端区域进行测序，在乔的鼓励下，我在1975年初就开始在它们上使用末端标记技术。manbet手机版我注册的^{manbet手机版32}manbet手机版P同位素放射性标记的脱氧核苷残基进入manbet手机版四膜虫manbet手机版rDNA分子，使用商业化的DNA聚合酶manbet手机版在体外manbet手机版DNA修复酶反应。manbet手机版结果马上就很有希望。manbet手机版首先，很明显，rDNA的末端区域被某些组合选择性地标记^{manbet手机版32}manbet手机版P同位素放射性标记的核苷三磷酸底物。manbet手机版到1975年6月，我变得异常兴奋:我获得了我的第一个二维分离的放射自显影^{manbet手机版32}manbet手机版P标签的去嘌呤产品。manbet手机版4个胞嘧啶(C)残基运行的强烈信号是明显的。manbet手机版此外，每个这样的C4序列两侧都有嘌呤残基(即腺苷(a)或鸟苷(G)残基;manbet手机版这个初始数据没有显示是哪一个)。manbet手机版脱嘌呤反应的原理如下:新西兰人肯·伯顿(Ken Burton)证明，可以通过化学反应将每个嘌呤核苷酸两侧的DNA主干裂解，但保留任何不被嘌呤核苷酸打断的嘧啶核苷酸(如C残基)。manbet手机版这种所谓的脱嘌呤方法，当应用于复杂的DNA序列如噬菌体基因组时，维克·林(Vic Ling)进一步发挥了作用，当时他是英国剑桥市弗雷德·桑格实验室的博士后。manbet手机版Vic已经证明，当使用二维分馏方法时，所得到的短嘧啶束(单核苷酸、二三核苷酸等)将产生一种类似网格的产品模式(见manbet手机版伊丽莎白·布莱克本2009年诺贝尔奖演讲manbet手机版，在本卷)。manbet手机版在随机基础上，最常见的产物当然是单核苷酸和二核苷酸，较长的三核苷酸和四核苷酸束在随机基础上越来越少。manbet手机版因此，这个强烈的C4点是有趣的和有信息的。

manbet手机版我也很清楚，rDNA分子不是简单的噬菌体样DNA。manbet手机版首先，终端片段是异构的。manbet手机版相比之下，对于任何一种兰博德噬菌体，每个病毒颗粒中的DNA分子都是完全相同的——一个完美的碳拷贝——与其他病毒颗粒中的相同。manbet手机版其次，在每个DNA分子的基础上，如果rDNA分子末端与lambda噬菌体的粘性DNA末端相似，则会发生比预期更多的放射性标记核苷酸前体底物的合并。manbet手机版同样幸运的是，C4重复具有如此有规律的性质，恰好连续有4个c。manbet手机版即使是三个C也会引人注目，但更难解开。manbet手机版事实上，在我反复制作的2D分色图(我们在弗雷德·桑格的实验室里称之为“同色图”)中，C4点一直像灯塔一样突出。

manbet手机版接下来，我需要独立验证我所标记的东西manbet手机版在体外manbet手机版有效地反映了rDNA序列，并试图更接近地估计每个rDNA分子C4跑的次数。manbet手机版因此我决定我需要这样做^{manbet手机版32}manbet手机版P同位素标记rDNAmanbet手机版在活的有机体内manbet手机版．manbet手机版绝大多数的^{manbet手机版32}manbet手机版P同位素(在化学上以无机磷酸盐离子的形式存在)被带入细胞后会与其他分子结合，包括更丰富的细胞RNA，其中很少会在DNA中结束，而在rDNA中就更少了manbet手机版四膜虫manbet手机版在大多数DNA中，只有百分之一左右是rDNA)。manbet手机版因此，我怀着忐忑不安的心情请求乔·加尔允许我订足量的货^{manbet手机版32}manbet手机版将磷酸磷添加到细胞生长培养基中以标记rDNA。manbet手机版这意味着一次处理2毫升，这是乔的实验室以前没有做过的。manbet手机版但我知道这是目前唯一可以获得足够数量的^{manbet手机版32}manbet手机版P进入rDNA，在自放射图中检测C4点，在背景上方。manbet手机版乔可能也有些心惊胆战地答应了。manbet手机版我在“热室”工作，这是一个专门用来做放射性同位素工作的房间。manbet手机版1975年10月9日^{manbet手机版32}manbet手机版P被送到了耶鲁。manbet手机版我那时的实验室笔记本上写着:^{manbet手机版32}manbet手机版P储存在冰箱。manbet手机版直到使用-检测为10/14。manbet手机版10/14下午3点。manbet手机版在1% PPS培养基空白上调零[细胞培养]，添加2mci^{manbet手机版32}manbet手机版P为h3 PO4，从注射器取1毫升水。manbet手机版下一道菜我把它提高到5毫升。manbet手机版加尔实验室的同事们对这种与实验室日常活动非常不同的放射性活动感到好奇，在我工作时，他们定期从热房间门上的窗户往里看。

manbet手机版1975年10月22日，我有了^{manbet手机版32}manbet手机版P rDNA纯化。manbet手机版那天，我得意洋洋地在笔记本上写下了制作这个珍贵样品的计划:

manbet手机版" 1)脱嘌呤
manbet手机版2) EcoRi处理后变性凝胶
manbet手机版3) 1.4%琼脂糖凝胶”

manbet手机版一个接一个地，我把各种核酸酶施加到rDNA的末端区域。manbet手机版我发现它可以用一种三磷酸盐选择性地进行放射标记^{manbet手机版32}manbet手机版P标记一次。manbet手机版然后，我进行了当时可能的一系列分析，使我能够拼凑出核苷酸序列:我用核酸内切酶IV核酸酶或微球菌核酸酶消化放射性标记的末端区域，并进行去吡啶和核苷酸最近邻分析，以及脾脏磷酸二酯酶消化(图3)。

manbet手机版将rDNA末端序列拼凑起来是一个小心翼翼的谜题解决过程。manbet手机版在一个中间点上，我当时的笔记本显示我必须考虑两种可能性——CCCCAG和CCCCAA重复(图4)。但很明显，有大量的重复副本。

manbet手机版但到了1976年4月8日，我确信正确的序列已经推导出来了，因为在我的实验室笔记本页面上，以这个日期为标题的条目是:

manbet手机版1976年8月17日的另一页实验室笔记本显示，我已经以一种例行的方式引用(CCCCAA)_{manbet手机版n}manbet手机版序列-到那时，在实验的过程中，旨在观察相同的重复序列是否也出现在其他(长得多的)染色体dna中manbet手机版四膜虫。

manbet手机版我把我观察到的所有情况都考虑进去，整理出了一张图片。manbet手机版推导出的序列由CCCCAA重复序列串联阵列组成。manbet手机版1979年做的一个实验，用放射标记rDNA^{manbet手机版32}manbet手机版P标记的dCTP，和未标记的dAT P，在变性凝胶电泳上分离产物，直观地显示这是一个漂亮的老虎条纹的梯子延伸到凝胶上。manbet手机版这个普通梯子上的每个带子比下面的带子多6个底座!manbet手机版这种显著特征的可见的条带模式预示了一种模式，这种模式后来对我们发现端粒酶的活性非常重要，正如本卷中所描述的manbet手机版2009年诺贝尔奖演讲由我的共同获奖者卡罗尔·格莱德主持manbet手机版．

manbet手机版在1976年4月之后的几个月里，我也花了很多精力试图理解CCCAA重复DNA束上的链不连续的排列。manbet手机版为此，我进行了大量的实验，遵循动力学和放射标记RNA末端区域的特异性，使用多种不同的酶和协议和分析。manbet手机版这也是一个把东西拼凑起来的问题——没有模板供我工作，因为这都是未知的领域。

manbet手机版在20世纪70年代末和80年代初，我做了各种放射标记实验，试图预测纤毛原生动物和酵母线性质粒端粒末端的结构。manbet手机版我可以拼出一张合成图，但仍然不完整。manbet手机版回想起来，我意识到，有些特征可能归因于端粒末端的G链序列假设G-G配对或G-四重奏结构。manbet手机版但其他特征就不那么容易解释了。manbet手机版为什么我能够用DNA聚合酶或激酶标记链来得到标记链和核苷酸的模式，我所做的仍然没有完全符合DNA末端分子结构的一致观点。manbet手机版各种各样的manbet手机版在体外manbet手机版无线电标记实验表明，两者manbet手机版四膜虫manbet手机版在低三色纤虫的rDNA和大核dna中，有一个短的富g链悬垂，由几个端粒重复序列组成。manbet手机版目前的观点是，在哺乳动物的端粒中，有一条长而突出的富含g的链。manbet手机版然而，这并没有考虑到我发现的短C链重复寡核苷酸可以很容易地从端粒DNA上熔化的明确证据。manbet手机版这是我发现的manbet手机版四膜虫manbet手机版从酵母菌中纯化的rDNA小染色体分子和线性质粒。manbet手机版这些微小的端粒序列寡核苷酸可以通过二维分馏进行放射标记和清晰识别。manbet手机版然而，它们的意义仍然未知。manbet手机版直到今天，端粒DNA末端区域的结构还是个谜;manbet手机版染色体的末端仍然是一个挑战。

manbet手机版端粒蛋白:最早的尝试和失败

manbet手机版在我早期的工作中，我对端粒的分子观点首先集中在DNA上;manbet手机版不仅因为DNA在我心中是最重要的，而且好几年来，DNA也是端粒中唯一被确认的成分。manbet手机版这并不是因为没有尝试。manbet手机版我认为DNA不是染色体末端的全部，从20世纪70年代出现的关于染色质的研究延伸，我认为端粒DNA重复序列很可能被蛋白质包裹。manbet手机版20世纪70年代，人们对染色质产生了极大的兴趣，并发现了核小体作为真核DNA的基本包装单位。manbet手机版端粒序列manbet手机版四膜虫manbet手机版在这方面对我来说非常有趣，一旦我确定了端粒DNA，我就想要拿到包装它的东西。manbet手机版因此，当我还是Joe Gall实验室的博士后时，我对分离的微球菌核酸酶进行了处理manbet手机版四膜虫manbet手机版细胞核。manbet手机版我发现CCCCAA_{manbet手机版n}manbet手机版端粒束在染色质中作为一种异质的DNA片段受到保护，这与预期的核小体包装非常不同。

manbet手机版1978年3月1日，我从耶鲁大学乔·加尔(Joe Gall)的实验室搬出来后不久，还暂时在加州大学旧金山分校(UCSF)担任独立研究职位(在我搬到加州大学伯克利分校(University of California Berkeley)担任助理教授之前)，我给乔·加尔(Joe Gall)写信说:“我对获得CCCCAA证书感到非常兴奋_{manbet手机版n}manbet手机版的结合蛋白复合物manbet手机版四膜虫manbet手机版所以我一直在忙着制造rDNA, CCCCAA_{manbet手机版n}manbet手机版探针，和大核微球菌核酸酶消化。manbet手机版到目前为止，我已经找到了一个简单的盐分馏丰富CCCCAA_{manbet手机版n}manbet手机版序列加上假定的蛋白质。manbet手机版目前的计划是进一步纯化它，这样我就可以得到任何这种复合体的一些结构特征，即S值，以及根据一维和二维凝胶电泳特性对蛋白质进行一些识别……当然，另一方面是寻找能够粘附在CCCCAA上的东西_{manbet手机版n}manbet手机版列。”

manbet手机版到1980年，我做了一项实验来证明DNA的端粒束manbet手机版四膜虫manbet手机版被包裹在不包括核小体的蛋白质保护鞘中。manbet手机版绝大多数染色体DNA被包装成核小体:DNA-蛋白质复合体。manbet手机版每个核小体都是由组蛋白组成的扁平球，DNA在组蛋白周围包裹了两次。manbet手机版最基本的(带正电荷的)组蛋白中和了沿DNA磷酸二酯主干排列的磷酸盐化学基团的负电荷，并使染色体DNA在细胞核中紧密排列和紧密折叠。manbet手机版人工拉伸的染色体中的核小体就像串在绳子上的珠子，尽管它们大多在细胞核中紧密地排列成更短更粗的纤维。manbet手机版如果一个人用一种酶(微球菌核酸酶)剪断染色质，它会切断相邻核小体之间的连接DNA的两条链，在去除组蛋白后，可以看到剩下核小体大小的DNA片段——一个大约有142个碱基对的片段被核小体的组蛋白核心保护着，一旦DNA连接子被修剪掉。manbet手机版这种核酸酶的剪切行为是核小体的标志。manbet手机版与染色体的核小体区域不同，DNA的特殊区域，例如必须与控制转录的转录起始因子结合的启动子，上面有组蛋白以外的蛋白质。manbet手机版端粒重复束就是这样一个非核小体区域。manbet手机版我们发现，如果我们使用一种酶来切断相邻核小体之间的连接，它将大部分DNA切割成核小体大小的片段，但将端粒DNA束保留为单个受保护的块。 The resulting complex of the telomeric DNA tract plus its bound cargo of protective proteins behaved very differently, by various tests, from standard nucleosomal chromatin, and therefore we concluded that it had no histones or nucleosomes.

manbet手机版到1977年，人们从雷科什的研究中知道了它manbet手机版等manbet手机版．manbet手机版腺病毒DNA有一个共价结合的末端蛋白，可能是为了病毒基因组复制。manbet手机版因此，在1979年，我在加州大学伯克利分校实验室的博士后Marsha Budarf开始使用废弃的放射性碘程序(波顿-亨特试剂)，看看我们是否能在rDNA末端找到任何类似的蛋白质。manbet手机版尽管玛莎发现了一种共价连接的蛋白质(事后看来可能是拓扑异构酶I)在rRNA转录区域的末端富集，但它在rDNA分子的末端并没有富集。manbet手机版她无法在rDNA的其他地方检测到任何其他共价连接的蛋白质。manbet手机版任何关于rDNA分子末端的蛋白质的证据，比如它们在凝胶电泳中的行为和rDNA分子在电子显微镜下的外观，都明显缺乏。manbet手机版这使我更加确信在这个小染色体体的末端没有共价连接的蛋白质。manbet手机版但是端粒上还有什么蛋白质呢?

manbet手机版我的实验室是第一个尝试识别这些保护性蛋白质的实验室。manbet手机版我们使用生化分馏manbet手机版四膜虫manbet手机版核提取物。manbet手机版我1979年的笔记本记录了我和加州大学伯克利分校分子生物学系的技术人员赵三三一起，一次又一次地尝试从核仁中纯化端粒蛋白。manbet手机版核仁是在manbet手机版四膜虫manbet手机版含有积极转录的rDNA小染色体的细胞核。manbet手机版分馏后的分馏，主要使用蔗糖梯度，由三三耐心执行。manbet手机版然后我们扩大了准备的规模——我买了一个巨大的工业规模的沃林搅拌机，它在实验室的长凳上显得像一只庞然大物。manbet手机版四膜虫manbet手机版混合细胞的目的是将它们打乱，使它们的核仁从其他核内容物中分离出来。manbet手机版有一次，我在笔记本上简洁地写道:“Respun只占总数的三分之一……Waring搅拌机坏了。”

manbet手机版所有这些早期的努力都是徒劳的。manbet手机版回想起来，实验方法是合理的——提纯核仁，因为它是已知的最丰富的端粒染色质形式，然后用微球菌核酸酶将其消化成片段，即包含端粒DNA末端束及其结合蛋白的片段。manbet手机版然后，通过在氯化钾溶液中的选择性沉淀，我将进一步将这些从染色质中分离出来，或者根据蔗糖梯度的大小将它们分离。manbet手机版我们的目标是观察哪些蛋白质会通过这些多重分离步骤，与端粒重复束DNA共同纯化，我通过它的杂交信号跟踪它的多重步骤。manbet手机版但我们只能获得有限数量的染色质和结合因子，我们试图获得足够的数量来识别任何可能特定于rDNA末端的因子，但没有成功。manbet手机版回顾过去，我发现我们是在与数字游戏作斗争——我们的检测方法太薄弱，我们的准备规模太有限。manbet手机版因此，是酵母遗传学和其他人的方法为理解端粒蛋白提供了下一个巨大的飞跃。manbet手机版我之前尝试用manbet手机版四膜虫manbet手机版这让我更加坚定了决心，如果有的话，我要用其他的方法来尝试理解染色体末端那些看似奇怪的重复序列的本质和生物学意义。

manbet手机版我还记得，我们没有找到端粒蛋白，这给我们上了一课，对我们的工作非常有用manbet手机版四膜虫manbet手机版端粒酶。manbet手机版正如卡罗尔·格莱德(Carol Greider)在诺贝尔奖演讲中所描述的那样，在某一时刻，扩大端粒酶活性准备的价值变得显而易见。manbet手机版因此，当卡罗尔提议购买一个非常大的玻璃柱用于制备凝胶过滤层析时，我非常愿意进行这个看似昂贵的购买，遗憾地回忆起我过去过于胆怯的放大manbet手机版四膜虫manbet手机版染色质的准备。

manbet手机版加州大学旧金山分校

manbet手机版1986年，我成为加州大学伯克利分校的全职教授(在加州大学伯克利分校任教8年后)，同年，我成为了一名母亲(我们的儿子本杰明·大卫于1986年12月出生)。manbet手机版大约在1989年，我决定，因为每天从旧金山的家开车到伯克利要走很长的路，很难兼顾科学和家庭生活，所以是时候开始研究其他选择了。manbet手机版我决定在加州大学旧金山分校当教授，1990年中期，我的实验室搬到了加州大学旧金山分校的微生物和免疫学系。manbet手机版从那以后，我一直在加州大学旧金山分校任教。manbet手机版在那里，我有幸能够继续深入研究端粒和端粒酶的本质和机制。manbet手机版与加州大学旧金山分校内外的同事以及我实验室里许多有才华的学生、博士后和技术人员(图6)一起，我已经能够研究由端粒和端粒酶组成的奇妙生物系统。manbet手机版图7显示了一幅同时唤起端粒动力学和端粒研究人员的奇特描述。manbet手机版这幅画由艺术家朱莉·纽多尔(Julie Newdoll)在2008年完成，它让人联想到端粒是一个古老的苏曼人神庙般的蜂房，由一群古老的苏曼人蜂女神照料，背景是刻有DNA测序凝胶状带的泥板。

manbet手机版走出实验室

manbet手机版在20世纪90年代，我的研究对人类的影响开始引起我的兴趣，但由于科学研究、教员和系主任的职责、家庭和许多相关的义务，我几乎没有时间去钻研科学打开新的可能性时可能出现的哲学和政策问题。manbet手机版1998年，我担任了美国细胞生物学协会的主席，对国家科学政策的世界有了更多的认识。manbet手机版因此，在2001年底，考虑成为新成立的美国联邦委员会(总统的生物伦理委员会)成员的请求具有一定的吸引力。manbet手机版我认为，我在相关科学领域的知识，以及在研究领域的长期经验，将对委员会做出有益的贡献。作为一个联邦委员会，委员会将在国家科学政策的一些问题上提供咨询。manbet手机版更有吸引力的是，我对这些问题的思考也越来越多。manbet手机版我想，如果我加入这个委员会，它将是一个机会来思考这些方面的研究的分支，以及我自己的研究领域可能产生的反响。

manbet手机版现在还没有时间安静地审议这些和有关的抽象问题。manbet手机版我从一开始就知道，生物伦理委员会将忙于公开辩论的议题，包括人类体细胞核移植和胚胎干细胞研究，以及其他在委员会审议之初没有明确定义的议题。manbet手机版我认为我应该同意加入这个委员会，因为作为一名经验丰富的科学家(特别是在细胞和分子生物学方面)，我可能能够提供对国家科学政策有帮助的观点。manbet手机版我知道，由乔治·w·布什(George W. Bush)政府任命的这个委员会将提出的问题将是具有政治色彩的问题。manbet手机版为此，我觉得科学事实和证据的坚实基础将特别重要，这方面的有用建议实际上是我可以向这个咨询机构提供的。

manbet手机版我公开表明了我对安理会某些建议的看法，这些看法与白宫的意见或安理会主席的意见大体上不一致。manbet手机版两年后，乔治·w·布什政府的人事办公室通知我，我将不再是这个委员会的成员。manbet手机版他被开除出理事会一事在当时引起了相当多的公众注意。manbet手机版在这个过程中，我收到了大量的信件和通信，这使我不知所措。manbet手机版他们几乎无一例外都是积极和支持的，他们来自美国各地，甚至有来自伦敦的音乐家。manbet手机版他对科学政策的关注(对我来说)有些出乎意料，这让我认识到，公众希望科学政策有良好的科学证据的愿望是多么普遍。manbet手机版这整个事件是一次更广泛的教育。manbet手机版它增强了我对探索真理的热爱，这是许多研究和学术界人士梦寐以求的。

manbet手机版他们对我作为科学家的生活有重要影响

manbet手机版我感谢过很多人，在这里我只能描述其中的几个。manbet手机版在我成长的过程中，我的三位老师特别鼓励我对生物、化学和数学产生兴趣，尤其是让我知道他们相信我有能力在这些领域取得成功——南·休斯、珍妮·菲普斯和伦·斯图塔德。

manbet手机版当我开始从事生物科学研究时，我的老师、顾问和导师——尤其是澳大利亚的弗兰克·希尔德、英国剑桥的弗雷德·桑格和美国的乔·加尔——不仅传授了他们的科学知识、愿景和智慧，而且传授了他们如何成为科学家的榜样。manbet手机版特别是一张1999年Joe Gall的照片，虽然是在我进入他的实验室几年之后拍摄的，但它以简洁的视觉方式捕捉到了Joe的一些特征，这些特征在我还是他实验室小组的一员时对我产生了影响(图8)。这张照片是1999年夏天他在布拉格参加一个会议时拍摄的。manbet手机版在会议期间发生了日偏食，所有的与会者都冲出报告厅去见证会议的进展。manbet手机版乔在照片中展示了它可以很简单和安全地看到:一个人所要做的就是把一张平的纸放在一棵枝叶茂密的灌木下，让光穿过树叶衍射到纸上，在纸上出现月亮从它前面经过时“咬”掉的太阳圆盘的图像。manbet手机版我记得大多数与会者以前从未见过这个应用光学演示。manbet手机版这张照片立刻唤起了乔·加尔教书的欲望和能力——他用一个非常引人注目的演示向与会者传授了一些新知识——而且，不仅仅是让人瞥见了他广泛的光学和自然科学知识。

manbet手机版像许多对染色体行为着迷的人一样，我非常感谢芭芭拉·麦克林托克的科学发现。manbet手机版但除此之外,manbet手机版问麦克林托克芭芭拉manbet手机版也给了我一个难忘的教训:在1977年我和她的一次谈话中，我告诉她我在rDNA末端序列方面的意外发现，她鼓励我相信自己对科学研究结果的直觉。manbet手机版这个建议当时让我很惊讶，因为直觉思维在当时并不是我允许自己承认的生物研究者的一个有效方面。manbet手机版我认为她的建议认识到了科学研究的基础知识过程中一个重要的、有时被忽视的方面，对我来说，这是一个解放的方面。manbet手机版为此，我也非常感谢芭芭拉·麦克林托克。

manbet手机版我的丈夫，约翰·塞达特，他本身就是一个有成就的科学家，他总是鼓励我更深入地挖掘自己，找到我可能没有挖掘到的力量储备——他用这种方式鼓励了我多年的科学研究。manbet手机版我们的儿子Ben(图9)激励着我去寻找将家庭和科学结合起来的方法，这也是我试图传达给年轻科学家们的事业。manbet手机版最后，我的父母都是家庭医生。manbet手机版从他们身上，我懂得了为人们提供友善和尽可能好的服务的重要性。manbet手机版我仍然相信，生物伦理学，如果做得好，并有最好的科学证据作为基础，可以成为我们社会考虑生物科学和医学科学研究对人们的影响的重要组成部分。

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