manbet手机版在明尼苏达州的小瀑布长大

manbet手机版1955年5月30日，贝蒂(伊丽莎白)和富兰克林·科比尔卡在明尼苏达州的小瀑布镇(Little Falls)出生了两个孩子，我是其中的第二个。小瀑布镇位于密西西比河沿岸，人口约7000人。manbet手机版虽然按大多数标准来看小瀑布镇很小，但小瀑布镇是莫里森县最大的城镇，以先驱飞行员查尔斯·林德伯格少年时代的故乡而闻名。manbet手机版我姐姐帕姆比我大三岁(图1)。我父亲在小瀑布拥有并经营一家面包店。

manbet手机版对于一个小镇来说，父亲的面包店算是比较大的了，有6-8名全职员工和几个兼职高中生，他们在放学后从事各种各样的工作。manbet手机版我和姐姐从13岁起就在面包店做兼职。manbet手机版我的第一份工作是在当地超市出售的面包切片和包装。manbet手机版在面包店工作让我有机会看到父亲的实际行动。manbet手机版这家面包店在第二次世界大战前由我的祖父和叔祖父经营。manbet手机版当我父亲从部队服役回来后，他接管了面包店的管理，并开始将面包店从一个简单的店面业务扩展到向当地超市、餐馆和学校供应新鲜烘焙食品。manbet手机版面包店是一个相对复杂的小型企业，通过生产各种各样的优秀烘焙食品，包括面包，糕点，蛋糕和糖果而繁荣起来。manbet手机版为了完成所有这些工作，我父亲必须能够完成面包店的每一项工作，因为当有人请病假时，他必须能够填补空缺:烤面包、糕点和甜甜圈，装饰蛋糕，驾驶送货卡车。manbet手机版他还负责所有的采购、计划生产、管理会计、工资和广告。manbet手机版我相信他的成功是由于他多才多艺、职业道德、幽默感以及激励人们尽力而为的能力。 While I have a very different occupation, I believe that I learned a lot from my father that has helped me manage a research group.

manbet手机版图1。manbet手机版妈妈，我，帕姆和爸爸，1960年圣诞节。

manbet手机版我在圣玛丽小学读到八年级，然后转到小瀑布高中。manbet手机版我在小学时并不是一个特别好的学生。manbet手机版我记得在学习阅读时遇到了一些问题。manbet手机版然而，当我进入高中的时候，我已经克服了这些问题，在学业上做得很好。

manbet手机版我对科学的兴趣可能源于我想成为一名医生的兴趣。manbet手机版当地人对医生的尊重给我留下了深刻的印象，我尤其钦佩住在我家附近的儿科医生。manbet手机版每当我生病的时候，我都会被带到他的办公室或他的家治疗。manbet手机版我在高中最喜欢的课程是数学、物理、化学和生物。manbet手机版我觉得主题很有趣，老师也很有吸引力。manbet手机版我在语言、文学和写作方面做了更多的努力，但幸运的是，我有一位老师坚持让我们学习用写作来表达自己。

manbet手机版虽然我不是一个有天赋的运动员，但我喜欢跑步(越野和田径)和骑自行车。manbet手机版我的一位老朋友蒂姆·汉森(Tim Hansen)把我介绍给了自行车旅行和比赛，他是我的儿科医生的儿子。manbet手机版蒂姆高中毕业时(他17岁，我14岁)，他说服我的父母让我和他一起骑自行车去黄石国家公园旅行，然后再回来——大约1400英里。manbet手机版从图中你可以看到，我们又小又瘦，重量只比我们的自行车和齿轮多一点点(图2)。

manbet手机版图2。manbet手机版1969年夏天，我在怀俄明州骑自行车。manbet手机版回程那天我和蒂姆(最左)在路上的照片。

manbet手机版每天骑完平均100英里后，我们会找个地方免费过夜。manbet手机版我们睡在学校、教堂、私人住宅，有两次还睡在牢房里。manbet手机版这是一次奇妙的经历，我还记得奋力爬上山口，从前轮向上看，看到一只巨大的雄性驼鹿在路边吃草。manbet手机版我迷上了自行车，在接下来的几年里，我在夏天骑自行车穿越美国，环游英国，也参加一些比赛。manbet手机版我仍然喜欢骑自行车，2005年环法自行车赛期间，我有幸和儿子杰森一起在比利牛斯山骑行(图3)。

manbet手机版图3。manbet手机版2005年7月，贾森(左)爬完图尔马莱山。

manbet手机版本科年

manbet手机版1973年，我进入位于德卢斯的明尼苏达大学，打算学习生物学，为上医学院做准备。manbet手机版在我的第一个任期内，我遇到了两个人，他们对我的生活和事业产生了深远的影响。manbet手机版第一次也是最重要的一次相遇发生在生物实验室。manbet手机版学生们四人一组。manbet手机版第一天上课，我所在的小组由三个大一新生和一个怒气冲冲的大二学生组成。manbet手机版那个大二学生(童孙天饰)，因为在实验室的选择上不得不听从大一新生而感到沮丧，后来在1978年成为了我的妻子(关于童孙的事以后再说)。

manbet手机版第二个重要的接触是康拉德·弗林教授，他是生物学教授，教了这门课和我的实验部分。manbet手机版弗林教授充满热情和激情地讲授基础生物学。manbet手机版我了解到，他愿意带本科生到他的实验室从事发育生物学的项目。manbet手机版我学到的第一个技巧是正确的清洗玻璃器皿的方法，我洗了很多玻璃器皿。manbet手机版我最终开始做实验帮助弗林教授开发了一种器官培养基manbet手机版Chironomous tentansmanbet手机版这是一个发育生物学的模型系统。manbet手机版孙彤也加入了Firling实验室，和我一起做这个项目。

manbet手机版本科时，我的专业是生物和化学，得益于优秀的老师和小班教学。manbet手机版除了与弗林教授合作外，我还与有机化学家罗伯特·卡尔森教授合作了一个暑期项目。manbet手机版尽管我对基础研究越来越感兴趣，我还是申请了十所医学院和一些研究生项目。manbet手机版我仍然憧憬着在医学方面的职业生涯，如果我没能进入医学院，研究生课程是我的备用选择。manbet手机版在我申请的医学院中，耶鲁是遥遥领先的。manbet手机版当我收到录取通知书时，我非常惊讶。

manbet手机版耶鲁大学医学院

manbet手机版我搬到纽黑文是一种文化冲击，因为内城的位置和学术环境。manbet手机版这所医学院所在的社区深受犯罪和贫困的困扰。manbet手机版在学校里，我被我的同学吓到了，他们中的许多人来自常春藤盟校，有些人在医学之外的职业生涯很成功。

manbet手机版在耶鲁大学，所有的医科学生都被要求写一篇基于原始研究的论文，这篇论文要放在我们正常的课程表和假期里。manbet手机版我的第一个研究项目涉及登革热，让我花了一个夏天在马来西亚的一个实验室里进行热带流行病学研究。manbet手机版这让我有机会直接观察实地研究，也让我在比在耶鲁更原始的条件下进行实验工作。manbet手机版虽然这个项目没有成功，但它是一个很好的经历，让我短暂地考虑把热带医学作为自己的职业。manbet手机版在我的论文项目中，我与流行病学系的病毒学家Denis Knudsen教授合作，研究轮状病毒的遗传多样性，轮状病毒是儿童肠胃炎的常见病因。

manbet手机版1978年，我在医学院读了一年后，孙彤和我结婚了。manbet手机版在耶鲁大学，她在Caroline Slayman教授的实验室工作，并利用业余时间获得了东亚研究硕士学位。

manbet手机版在巴恩斯医院接受临床培训

manbet手机版我从医学院毕业后的职业道路很早就被经济拮据所决定。manbet手机版我的医学院学费是由公共卫生服务团奖学金支付的，该奖学金要求我在住院医师培训结束后在一个医疗服务不足的社区工作三年。manbet手机版因此，从事研究并不是一个直接的选择。manbet手机版我决定成为内科住院医师，并被匹配计划分配到巴恩斯医院的一个职位，该医院隶属于密苏里州圣路易斯市的华盛顿大学医学院。manbet手机版在巴恩斯的最后一年，我的职业选择发生了变化。manbet手机版由于预算削减，许多公共卫生服务项目失去了资金。manbet手机版因此，我得以在一所学术性医院工作三年，以偿还医学院奖学金，这给了我探索基础研究的机会。

manbet手机版在巴恩斯医院接受临床培训期间，我对重症监护医学特别感兴趣。manbet手机版在三个重症监护室(医疗、肺和心脏)之一入住的患者通常非常不稳定，需要紧急干预，通常需要对G蛋白偶联受体(GPCRs)(包括肾上腺素能受体和毒菌碱受体)和阿片类受体进行药物作用，以调节心率和血压，以及控制疼痛。manbet手机版我对重症监护医学的兴趣促使我申请了心脏病学奖学金。manbet手机版我对杜克大学的一个项目特别感兴趣，这个项目允许研究员在基础研究实验室工作几年。manbet手机版此外，杜克大学Robert Lefkowitz的实验室正在进行肾上腺素能受体的开创性研究，这给了我机会去探索心血管和重症监护医学相关领域的基础研究。manbet手机版我很幸运被奖学金项目和莱夫科维茨实验室录取了。

manbet手机版杜克大学的奖学金培训

manbet手机版在圣路易斯的时候，孙彤和我开始了我们的家庭。manbet手机版我们的儿子杰森出生于1981年6月7日，也就是我开始实习的前一周。manbet手机版我们的女儿梅根出生于1983年11月28日，也就是我住院的最后一年。manbet手机版我唯一的遗憾是，在这段时间里，我的训练和电话安排让我没有更多的时间和我年轻的家人在一起。manbet手机版1984年6月，我们把所有的东西都装进一辆U-Haul拖车里，然后我向东开到了北卡罗来纳州的达勒姆(Durham)，我们一家乘飞机跟在后面(图4)。我们搬进了一套宽敞但通风的两层公寓，离大学几英里远，我经常跑着去上班，把车留给孙彤(Tong Sun)和孩子们。manbet手机版我开始来回跑去圣路易斯上班，这是我锻炼身体的唯一方式。manbet手机版单程大约5英里，如果我在退伍军人医院工作的话，就是8英里。manbet手机版我会把衣服放在背包里，在医院洗澡。manbet手机版我在杜克大学跑步的通勤时间更短，所以在去实验室之前，我经常会在杜克的跑道上跑5英里。manbet手机版在实验室的头几年里，我的身体处于我一生中最好的状态。 Tong Sun had taken up running regularly in St. Louis, and in Durham we would often take the children to a local high school track and take turns running while Megan and Jason played in the long-jump sand pit or jumped on the cushions for the pole vault.

manbet手机版图4。manbet手机版早些时候在北卡罗来纳州的达勒姆。manbet手机版从右起:孙彤、杰森、梅根和我。

manbet手机版杜克大学(Duke University)为心脏病学研究员提供了在完成18个月的临床轮转之前，从研究实验室开始的选择。manbet手机版这对我来说是完美的，因为我厌倦了每2到4个晚上都要值班，我想花更多的时间和我的家人在一起。manbet手机版我在莱夫科维茨实验室的头几周有点尴尬。manbet手机版作为巴恩斯医院的一名高级住院医师，我负责一个由初级住院医师和医科学生组成的团队，负责照顾20-30名病人。manbet手机版在加入莱夫科维茨实验室后，我成为了一群非常有才华的年轻科学家中经验最少的人，他们主要由博士后和一些研究生组成。manbet手机版当时我对所用的任何技术都不熟悉，还需要熟悉莱夫科维茨实验室的相关文献。manbet手机版我的同事们都很友好，但也都忙于自己的项目，我真的不知道从哪里开始。

manbet手机版在莱夫科维茨实验室的头几个月里，在学习配体结合和腺苷酸环化酶测定等基本技术的同时，我开始意识到要获得一个cDNA克隆的努力manbet手机版βmanbet手机版2肾上腺素能受体(manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版基于“增大化现实”技术)。manbet手机版这是莱夫科维茨集团和默克公司的合作项目。manbet手机版当时还是研究生的杰夫·贝诺维奇(Jeff Benovic)已经成功地做到了足够的净化manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版从仓鼠肺组织AR中获得多个肽序列。manbet手机版这些被用于从cDNA文库中分离克隆的简并和“猜测”寡核苷酸探针。manbet手机版理查德·迪克森是默克公司一位经验丰富的分子生物学家，他正在进行克隆工作。manbet手机版这正是我希望参与的研究项目类型，所以我问我是否可以贡献自己的力量。manbet手机版在项目的这个阶段，几乎所有的工作都是在默克公司完成的，鲍勃·莱夫科维茨认为我可以尝试产生提纯的抗体manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR，然后可以用表达克隆的方法来识别cDNA克隆。manbet手机版这个项目相对简单。manbet手机版我会从仓鼠肺组织中纯化蛋白质，然后给兔子免疫。manbet手机版这让我忙了好几个月的业余时间，在我的业余时间，我开始测试各种细胞系，试图找到一个表达高水平的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR用于制造cDNA文库。manbet手机版我筛选了大约10个细胞系，发现很多似乎表达了相对大量的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版在很短的一段时间里，我觉得自己为这一努力做出了真正的贡献。manbet手机版不幸的是，我的一位经验丰富的同事仔细检查了我的数据和方法，发现我所检测到的大部分是manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR实际上是放射性寡聚体与膜脂的非特异性结合。manbet手机版直到今天，我还记得与这些拙劣的实验相关的失望和愚蠢的感觉。manbet手机版我的抗体工作有所进展，我能够获得能够识别受体的抗体，但多克隆血清在western blots上与许多其他蛋白质发生反应，特异性不够，无法用于克隆目的。

manbet手机版简而言之，我在实验室的前五个月并不成功。manbet手机版令人惊讶的是，鲍勃允许我继续。manbet手机版尽管我在莱夫科维茨实验室的生物化学和药理学专业知识的克隆工作中没有做出任何有意义的贡献，鲍勃还是允许我花时间在默克公司从理查德·迪克森那里学习分子生物学。manbet手机版在接下来的几个月里，我去了几次理查德位于费城北部默克公司普鲁士王基地的实验室。manbet手机版这相当于密集的培训课程，在那里我学会了如何准备和筛选cDNA文库。manbet手机版当我回到杜克大学时，鲍勃同意我在莱夫科维茨实验室建立一个分子生物学实验室。manbet手机版孙彤(音译)有微生物学硕士学位，她被雇佣来帮助我们刚刚开始的分子生物学研究。在接下来的几个月里，我将与其他几个新的博士后和一个研究生一起工作。manbet手机版我们最初的目标是筛选Richard Dixon准备的库。manbet手机版在此期间，我有了另一种非特定绑定的经验。manbet手机版我们最初的许多“命中”结果是与探测器的非特异性相互作用。 This led to many cycles of exhilaration and disappointment common to many research efforts.

manbet手机版经过大约一年的失败，我们得出的结论是manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版在大多数细胞中，ARs的表达水平如此之低，以至于我们可能无法从cDNA文库中分离出一个克隆。manbet手机版此外，我们还担心我们正在使用的退化和“猜测”DNA探针。manbet手机版使用简并探针意味着我们有正确的序列，但也有许多不正确的探针可能导致非特异性假阳性。manbet手机版为了避免这种情况，我们利用密码子偏差信息对几个多肽的编码序列进行最佳猜测。manbet手机版这将限制非特异性的相互作用;manbet手机版然而，如果我们在猜测编码序列时犯了太多错误，我们就没有机会取出克隆体。manbet手机版我们意识到我们可能有更好的机会从基因组文库中提取DNA片段。manbet手机版即使基因组克隆是不完整的，并且被内含子打断了，我们认为它将提供一个更大、更具体的探针，使我们能够制造丰富的cDNA文库或识别现有文库中罕见的克隆。manbet手机版我用仓鼠肺的DNA做了一个基因组文库，并给默克公司的理查德发了一张假名。manbet手机版该文库最初由默克公司和杜克大学的几个早就猜测的探针进行筛选，两组都分离出一个克隆，令人惊讶的是，该克隆包含没有内含子的完整编码序列。 After almost two years of frustration, we had an amazing stroke of good fortune.

manbet手机版克隆的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR导致了其他几个肾上腺素能受体基因的克隆，以及一个孤儿受体，原来是血清素受体家族的成员。manbet手机版最初的G蛋白偶联受体(GPCR)克隆显示了与视紫红质共有的7个跨膜结构，这是一种专门用于光检测的GPCR。manbet手机版随后确定有9个基因编码不同的肾上腺素能受体亚型。

manbet手机版在获得一些肾上腺素能受体克隆体后，我开始探索理解受体结构的方法。manbet手机版我首先利用了与肾上腺素反应密切相关的受体，但激活了不同的信号蛋白，并与特定的合成激动剂和拮抗剂结合。manbet手机版由肾上腺素能受体和肾上腺素能受体产生的嵌合受体为受体的特定结构域在配体结合和G蛋白偶联中的作用提供了第一个线索。manbet手机版然而，这些研究并没有告诉我们受体是如何在分子细节上工作的，我开始考虑获得晶体结构。manbet手机版几年前Deisenhofer和Huber获得了膜蛋白的第一个晶体结构，证明了膜蛋白可以结晶，证明了蛋白质结构在理解机制方面的价值。manbet手机版然而，光合反应中心是一种天然丰富的蛋白质，可以从细菌中获得。manbet手机版相反，即使在肺组织中manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR最为丰富，只占膜蛋白的很小一部分。

manbet手机版斯坦福大学

manbet手机版1989年初，我开始考虑职业选择。manbet手机版杜克大学给了我一个初级教员的职位，我在圣路易斯的华盛顿大学、加州大学旧金山分校和斯坦福大学面试了类似的职位。manbet手机版在斯坦福大学，刚从耶鲁大学搬来的钱存理(Dick)教授正在一座叫做贝克曼中心的新楼里建立一个新的分子与细胞生理学系。manbet手机版我记得迪克在耶鲁医学院上过课;manbet手机版他是我们最喜欢的老师之一。manbet手机版他对斯坦福新部门的热情和远见给我留下了深刻的印象。manbet手机版大多数教职员工都是斯坦福大学的新员工。manbet手机版1989年洛马·普雷塔地震后不久，我接受了一个职位，搬到了斯坦福大学。

manbet手机版搬到斯坦福大学带来了许多挑战和机遇。manbet手机版最大的挑战是资金。manbet手机版我们将从最实惠的住房市场之一，变成最昂贵的住房市场之一。manbet手机版虽然我在斯坦福的收入会更高，但我们的抵押贷款将增加两倍，我们将只有一个人的收入，因为孙彤(音译)已经开始上医学院了。manbet手机版为了支付更多的抵押贷款和医学院学费，我每个月在附近一家医院做一两次急诊室医生，轮班48小时。manbet手机版在斯坦福大学的六年里，孙彤是一名全日制医科学生，我有机会花更多的时间和杰森和梅根在一起，作为他们的主要护理人员，弥补了我在住院医生培训期间错过的一些时间。

manbet手机版在实验室中，我关注了两个问题:理解激活的结构和机制manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR，并确定特定肾上腺素能受体亚型的生理作用。manbet手机版克隆和药理研究已经确定了9个肾上腺素能受体亚型编码9个不同的基因:3manbet手机版βmanbet手机版农业研究所,三manbet手机版α_{manbet手机版1}manbet手机版农业研究所,三manbet手机版α_{manbet手机版2}manbet手机版农业研究所。manbet手机版当时可用的药物没有足够的选择性，无法将特定的功能分配给每个受体亚型。manbet手机版为了解决这个问题，我们使用了最近开发的方法来破坏老鼠的基因。manbet手机版与我在斯坦福大学的同事Greg Barsh合作，我们为9个肾上腺素能受体基因中的5个(manbet手机版β_{manbet手机版1}manbet手机版基于“增大化现实”技术,manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版基于“增大化现实”技术,manbet手机版α_{manbet手机版2}manbet手机版基于“增大化现实”技术,manbet手机版α_{manbet手机版2 b}manbet手机版基于“增大化现实”技术,manbet手机版α_{manbet手机版2摄氏度}manbet手机版AR)，并能够分配它们在心血管功能和行为中的角色。

manbet手机版同时，我们也为未来的生物物理学和晶体学研究奠定了基础。manbet手机版我们继续使用诱变和嵌合受体来提供肾上腺素能受体功能域的更详细的地图。manbet手机版我们也在研究受体的生物合成和探索蛋白质工程技术，以实现表达和纯化足够数量的受体用于晶体学。manbet手机版我自己在实验室的工作重点是比较不同的表达系统(哺乳动物细胞、昆虫细胞、细菌和酵母)，并建立一个有效的纯化方案。manbet手机版到1993年，我们能够表达和纯化足够数量的功能蛋白manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR在昆虫细胞中开始使用荧光光谱，最敏感的生物物理技术之一，来研究受体结构。manbet手机版我们标记纯化manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR是一种小型的、对环境敏感的荧光探针，通常将它们连接到引入特定区域的单个活性半胱氨酸上。manbet手机版利用这种方法，我们能够实时观察配体诱导的构象变化。manbet手机版这些相对简单的荧光实验为研究荧光分子的动态特性提供了重要的见解manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR将最终指导我们的策略，使之具体化manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版基于“增大化现实”技术,manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR-Gs复杂。

manbet手机版随着表达和纯化策略的逐步改进，我们能够生产足够的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR开始晶体学试验。manbet手机版我在斯坦福大学的同事比尔·韦斯(Bill Weis)教我建立晶体学试验的基础知识，他将继续担任我的晶体学导师。manbet手机版这些最初的试验使我认识到许多类型的非蛋白质晶体(盐、清洁剂、脂类)，人们试图使膜蛋白结晶。manbet手机版每一轮失败的试验都导致了对方法的重新评估，随后是对战略的修改和新一轮的试验。manbet手机版在此期间，越来越多的原核膜蛋白结构被发表，提供了不断的灵感来源。manbet手机版但直到2004年我们才得到了第一个晶体manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版这些晶体非常小(β_{manbet手机版2}manbet手机版AR晶体到ESRF。manbet手机版使用高强度5微米光束，我们能够看到与蛋白质晶体兼容的衍射，分辨率约为20Å。manbet手机版虽然我们对衍射的差质量感到失望，但我们对能够形成晶体的事实感到鼓舞manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版这是一个重要的里程碑，表明晶体结构的努力manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR并不是一个不可能实现的目标。manbet手机版有了这个里程碑，我觉得我可以开始让博士后们参与进来了。

manbet手机版2005年，丹·罗森鲍姆和Søren Rasmussen，两位非常有才华和勇敢的博士后，加入了实验室，他们的目标是将manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR. Søren和Dan采用了两种不同的方法来产生质量更好的晶体manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR. Søren发现了与受体的一个特别灵活的区域结合的抗体，Dan使用蛋白质工程来取代受体的同一区域manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR与T4溶菌酶(T4L)，一种高度可结晶的可溶性蛋白质。manbet手机版这两种方法都是为了减小构象灵活性，增加形成晶格接触的极性表面积。manbet手机版在2006年，我们使用两种方法结合新开发的脂基介质bicelles获得了晶体，bicelles由脂类和清洁剂的混合物组成。manbet手机版初始晶体manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR-Fab和manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR-T4L融合蛋白复合体均衍射到4 Å以下。manbet手机版我们随后获得了3.4Å结构的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版在bicelles中生长的AR-Fab复合物。manbet手机版这是我们第一次看到三维结构manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR，但更高分辨率的结构很快就会出现。

manbet手机版2006年秋天，我们送去了纯化的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版在斯克里普斯雷蒙德·史蒂文斯的实验室里给瓦迪姆·切列佐夫注射了AR-T4L复合体。manbet手机版瓦迪姆曾在俄亥俄州立大学与马丁·卡夫瑞一起训练。manbet手机版马丁的实验室最近开发了脂质立方相(LCP)结晶学的小型化、高通量方法。manbet手机版我们以前探索了使用LCP方法来结晶manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR在1999年与Peter Nollert合作;manbet手机版然而，当时的方法是非常劳动密集型的，使用相对大量的蛋白质来筛选很少的条件。manbet手机版在马丁的实验室和他的团队制造的机器人一起开发的方法可以用几毫克的蛋白质筛查数千种疾病。manbet手机版瓦迪姆最近加入了史蒂文斯实验室，从马丁·卡夫瑞那里借来了一台LCP机器人。manbet手机版的2.4 Å结构manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR-T4L复杂。manbet手机版融合蛋白策略是为manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版自那以后，AR已成功应用于越来越多的其他GPCRs。

manbet手机版这些最初的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR结构代表非激活状态;manbet手机版然而，我们的目标是了解激动剂结合导致G蛋白激活的机制。manbet手机版在2005年的戈登会议上，我遇到了志同道合的Roger Sunahara，他在Al Gilman的实验室做博士后期间结晶了G蛋白G。manbet手机版罗杰和我很快就成了朋友，开始了一段非常愉快和富有成效的合作。manbet手机版在接下来的5年里，我们的实验室将使用各种方法来研究g被manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版与不可思议的同事网络(概述在我的manbet手机版诺贝尔演讲manbet手机版)我们将积累试剂和专业知识来稳定和结晶manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR-Gs复杂。manbet手机版的manbet手机版β_{manbet手机版2}manbet手机版AR-Gs晶体结构于2011年发表，并用单粒子电子显微镜和氘交换质谱表征了该配合物的动力学方面。manbet手机版这些联合研究为在分子水平上研究GPCR信号提供了前所未有的见解。

manbet手机版如上所述，我从与来自不同学科的同事的指导、建议和合作中受益良多。manbet手机版我特别荣幸的是，我的妻子Tong Sun Kobilka与我一起在实验室断断续续工作了30多年，为我提供了情感、智力和技术支持。manbet手机版能和她分享科学发现的喜悦，在研究进展不顺或资金紧张的时候能得到她的鼓励，真是太棒了。manbet手机版从几个方面来看，我的基础研究生涯都非常有意义:发现了新的知识，与许多才华横溢但往往令人生畏的学生和博士后合作，与世界各地的科学家建立了友谊，有了与家人共度时光的灵活性。manbet手机版我非常感谢我在G蛋白偶联受体方面的工作，以及它给我在该领域的同事们带来的认可，被授予诺贝尔化学奖。

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