manbet手机版我manbet手机版1940年，我出生在威斯康辛州的密尔瓦基市。1949年以前，我们一家一直住在市中心一家油漆店楼上的公寓里。manbet手机版虽然我父亲在密尔沃基的马凯特大学获得了法律学位，但他成了密尔沃基县医院负责人事的行政人员。manbet手机版我母亲在密尔沃基城外沃基夏县的一个农场长大，毕业于沃基夏的一所小型学院卡罗尔学院。manbet手机版我的母亲把她的时间花在抚养一个家庭所需要的所有家务上，这个家庭最终有了五个孩子——两个弟弟和两个妹妹。manbet手机版我父亲的父母住在20个街区外，我母亲的父母和她的兄弟一家住在沃克夏县的家庭农场。

manbet手机版我在埃尔姆街学校读小学，那是一栋带沥青操场的老砖房，离我们的公寓只有几个街区。manbet手机版我不太喜欢那所学校，经常在放学回家的路上被一群比我大一点的人打。manbet手机版二年级结束时，我带回家让父母签字的成绩单显示，我的成绩仅略高于不及格。manbet手机版我的父母很生气，问我打算怎么改变，我说我并不真的在乎成绩。manbet手机版我的母亲(我想)然后把“教育板子”用在了“知识之座”上——这是我第一次也是最后一次打屁股。manbet手机版这绝对是我学术生涯的低谷。

manbet手机版在我三年级的中期，我们从第27街搬到了密尔沃基郊区沃瓦托萨第75街的新房子里，我的生活在学业和其他方面都发生了改变。manbet手机版我的老师，学校和同学在小学，初中和高中都很了不起。manbet手机版罗斯福小学的操场上有网球场和一个草地操场，每年冬天在操场上建一个大型滑冰场，并配有取暖小屋和室外灯光。manbet手机版几乎在冬天的每个晚上，我都会和朋友们一起去滑冰，玩几个小时的团队滑冰游戏。

manbet手机版图1。manbet手机版大约1941年，我在祖父的臂弯里，站在他农场的田野里，旁边是他的牛。

manbet手机版上世纪四五十年代，我经常去祖父的农场，这对我那段时期的生活起了重要作用。manbet手机版他的农场被称为“卡车农场”，他在那里种植蔬菜，主要是萝卜、胡萝卜和洋葱。manbet手机版然而，在二战期间，他养了一头奶牛，可以喝牛奶、奶油和奶酪。1941年的一张照片显示，我和祖父以及他的奶牛在一起(图1)。我们全家经常去这个农场，那里距离沃瓦托萨只有30分钟的车程。manbet手机版这张照片拍摄于1952年，照片上我的父母和他们的五个孩子站在我祖父的绿色哈德逊汽车前，照片上是一片收割的麦田和祖母的一个花园(图2)。

manbet手机版图2。manbet手机版我站在我右边的爸爸妈妈和左边的弟弟迪克旁边。manbet手机版在前面的是玛丽，比尔和萨莉(从左到右)，大约在1952年。manbet手机版我们身后是我祖父1951年的哈德森庄园和祖母的一个花园。

manbet手机版在我十几岁的时候，我花了大部分暑假时间在我祖父和叔叔的农场里干活。manbet手机版我和其他许多孩子一起工作，把萝卜捆成捆，给20英亩的洋葱除草。manbet手机版除了星期六，每天早上5点左右日出后就开始工作，一直持续到下午晚些时候。manbet手机版(市场周日休市。)manbet手机版我每打萝卜5分钱，经常打到100打。manbet手机版我用这笔钱给自己买了一个新的萨克斯管，一辆自行车和一个网球拍，为上大学攒钱。

manbet手机版初中和高中离我大约有20分钟的步行路程，这让我认识了另外一组同学，重要的是，除了学术课程，我还接触了音乐、艺术和购物。manbet手机版初中的车间课程包括电学和磁学，我从零开始制作了一个电动机，缠绕线圈，并进行所有的连接。manbet手机版在木工店里，我给家里做了一张咖啡桌。manbet手机版我在塑料店里做开信刀和灯架。manbet手机版我不记得我做过什么金属加工。manbet手机版我发现，我在车间课程中学到的使用工具和材料的基本技能在后来的几年里对我来说是无价的，无论是在家里还是在实验室，包括构建蛋白质模型。manbet手机版我认为这是很不幸的，今天许多学校已经取消了这些课程，因为它们没有必要或太贵。

manbet手机版我在初中时对音乐产生了浓厚的兴趣，参加了乐队和合唱团。manbet手机版在乐队练习的第一天，我把我父亲的C旋律萨克斯给了乐队领导，他告诉我这在乐队里行不通，但把学校的降E高音萨克斯借给了我。manbet手机版我成为了一名非常认真的萨克斯演奏家，在高中时，除了在学校乐队演奏外，我还组织了一个大乐队风格的舞蹈乐队。manbet手机版我每天在家练习一到两个小时，在高中的时候，我在州比赛中赢得了许多“金牌”。manbet手机版我认真地考虑过成为一名音乐家，但后来得出结论，如果我从事科学，我可以把音乐作为业余爱好，但如果我从事音乐，就不能把科学作为业余爱好。

manbet手机版我在朗费罗初中的前两年，成绩基本都是B——不错，但也不是很好。manbet手机版然后，我的弟弟迪克在我二年级的中期上了初中，他的成绩是全A。manbet手机版这给我敲响了警钟，比赛开始了。manbet手机版我相信我第二年大部分成绩都是A。manbet手机版高中时我的成绩要好得多，毕业时在300多名学生中名列第八。manbet手机版在教室和网球场上，竞争都能激发学生的积极性。

manbet手机版幸运的是，我高中所有课程的学生都是根据他们在某一特定领域的学术能力进行划分的。manbet手机版因此，300名学生中最优秀的25-30名学生都在我的数学、科学和英语课上。manbet手机版当然，这意味着老师可以在更高的水平上指导我们，而不是从全班学生中随机抽取学生，我们从同学那里学习，并受到他们的挑战。manbet手机版我特别记得，在我的数学课上，那些女孩是多么地出色——前十名中只有两三个是男孩。manbet手机版我从不怀疑女性在数学方面和男性一样好，甚至更好，这与哈佛大学一位前校长的印象相反。manbet手机版我认为非常不幸的是，许多(如果不是大多数的话)高中(比如我家乡康涅狄格州布兰福德的那所)不再按能力划分学生;manbet手机版这并不能激励或正确地教育最优秀的学生。

manbet手机版劳伦斯学院
manbet手机版我选择上哪所大学很大程度上受到了我最好的高中朋友亚历克斯·王尔德的影响，最重要的是受到他母亲的影响。manbet手机版父亲想让我去马凯特大学(Marquette University)或威斯康辛大学(University of Wisconsin, Milwaukee)，但这两所大学都不吸引我。manbet手机版我非常了解王尔德一家，尤其是亚历克斯的母亲，她的父亲是当时来自威斯康辛州的参议员威利。manbet手机版她建议我申请亚历克斯打算去的劳伦斯学院，因为我付不起学费，所以我应该申请奖学金，我照做了。manbet手机版我获得了四年的全额奖学金，在访问劳伦斯学院之后，我知道了我想上哪所大学——这是一个重要的选择。

manbet手机版在劳伦斯学院的四年改变了我的生活、我的世界观和我的专业方向。manbet手机版由于劳伦斯是一所文科学校，我被要求学习许多人文学科的课程，以补充后来我的化学专业。manbet手机版这些课程从所谓的新生研究课程开始，这是一门广泛的阅读、讨论和写作课程，内容涉及许多经典书籍。manbet手机版我们学会了提问和回答问题。manbet手机版重要的是，我们还被要求选修一门哲学课程，一门以学术为基础的宗教课程(如尼布尔等)，一门人类学课程，以及英语、历史和语言课程。manbet手机版我带着浓厚的宗教背景进入劳伦斯，离开时对宗教信仰的起源、它们的真实性以及它们在文化中的作用有着完全不同的理解。manbet手机版劳伦斯还有一所音乐学校，所以我可以通过参加乐队、管弦乐队和合唱团来继续我对音乐的热爱。

manbet手机版虽然我在劳伦斯大学有许多优秀的、鼓舞人心的老师，但迄今为止对我追求科学事业，特别是化学事业影响最大的人，是罗伯特·罗森伯格教授，或者我现在可以叫他鲍勃(图3a)。manbet手机版我还记得在他早期的化学入门课上，他向我们介绍了原子轨道和成键的概念，以及如何在物理化学原子水平上学习化学，使我们能够理解化学物质的性质，比如它们的颜色。manbet手机版这对我来说是一个奇妙的启示，让我明白了我周围的世界是如何被理解的。

manbet手机版图3。manbet手机版我早期职业发展的一些重要导师:(A)鲍勃·罗森伯格，劳伦斯学院的化学教授，(B)威廉·利普斯科姆，我在哈佛的博士导师，(C)布莱恩·哈特利，我在英国剑桥分子生物学MRC实验室的已糖激酶探路者，(D)丹·库什兰，“诱导fit”先生，60年代中期LMB的董事会:约翰·肯德鲁和弗朗西斯·克瑞克，站着，休·赫胥利，马克斯·佩鲁茨，弗雷德·桑格和悉尼·布伦纳(拿着烟)坐着。

manbet手机版我有几次机会在劳伦斯以外的实验室从事研究项目。manbet手机版第一个机会是由鲍勃·罗森伯格安排的，我利用大三和大四之间的暑假在西北大学洛拉佐·罗兰的生物化学实验室做研究。manbet手机版我的项目是对各种对硝基苯酯底物类似物被凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶水解的动力学研究(测定kcat和Km)。manbet手机版测量完之后，我开始计算，这似乎很乏味。manbet手机版然后我决定编写一个计算机程序(我的第一个)来处理大学IBM 650上的数据。manbet手机版整个过程进行得如此之快，以至于我提前两周完成了我的暑期项目，并问自己下一步该做什么。manbet手机版有人让我做一些新的基质化合物的有机合成，我就开始了。manbet手机版当我在引风罩中与一些有机溶剂一起工作时，在点燃的本生灯的存在下，溶剂，回想起来并不奇怪，爆炸了(幸运的是没有人受伤)，这结束了我的有机化学研究生涯。

manbet手机版1961年，大四前的那个夏末，我受邀参加麻省理工学院的一个为期两周的会议，与会者都是来自小学院的理科生。manbet手机版这次独特的会议是由美国生物物理学会组织和资助的，目的是鼓励学生们考虑生物物理领域(我从未听说过这个领域)。manbet手机版来自二十多所顶尖小型大学的四名学生都被邀请参加，所有费用都由他们承担。manbet手机版这是我第一次坐飞机旅行，也是我第一次离开威斯康辛州，除了芝加哥。manbet手机版会场由来自哈佛大学和麻省理工学院的教师们主持，内容涉及广泛的生物物理学主题。manbet手机版我记得其中一位组织者j·昂克雷(J. onkley)坐在观众席上，穿着我所见过的皱巴巴的格子运动外套。manbet手机版最令人难忘的，不仅仅是它激动人心的内容，是Alex Rich的一次演讲。manbet手机版他的演讲确实鼓舞人心，而且是在我多年后从事的研究领域。manbet手机版他穿着一套漂亮的深色西装(不是今天的演讲服)，搭配白衬衫和领带。manbet手机版对我来说，另一个重要的讲座是来自哈佛的Paul Doty关于核酸生物物理研究的，这也是我后来想去哈佛的原因之一。 Students at the conference also had a great opportunity to interact with each other and go out to dinner together in various parts of Boston and Cambridge. I particularly remember dining with three Reed College students, who included Don Engelman and Mark Ptashne, as well as a few others who subsequently became fellow graduate students at Harvard. This two-week meeting was possibly inspired in part by the Kennedy call to respond to Sputnik. It was a truly important event for influencing the career choices of many of us, but unfortunately was not repeated.

manbet手机版大四那年秋天，我参加了一个由阿贡国家实验室的中西部小学院资助的针对选定学生的研究项目。manbet手机版我住在实验室的空地上，从事一个我既不喜欢也不记得的化学项目。manbet手机版在这个沉闷的学期里，我唯一记得的就是我第一次有机会去看莫斯科大剧院芭蕾舞团，并惊叹于男舞者在舞台上跳跃的能力。manbet手机版在劳伦斯和开始哈佛学习之间的那个夏天，我为杜邦公司做了另一个容易忘记的项目，测量各种合成布材料的动态拉伸模量，这些合成布材料被考虑用于制作胸罩。manbet手机版不幸的是，我没有被邀请加入评估正在建模的最终产品的小组。

manbet手机版哈佛大学
manbet手机版我去哈佛读研究生，从事核酸的生物物理学研究，但幸运的是，我选择了一条不同的道路。manbet手机版1963年我入学第一年的春天，我参加了三场邓纳姆讲座manbet手机版马克斯·佩鲁茨氏manbet手机版(图3E)，其中他提出了第一个原子分辨率蛋白质晶体结构，肌红蛋白的晶体结构。manbet手机版他展示了立体幻灯片，我惊讶地看到肌红蛋白的原子结构在Max的头顶上以三维的形式跳出来;manbet手机版这显然是理解大分子如何执行其生物功能的方法。manbet手机版此后不久，在与利普斯科姆学院的一名研究生(彼得·波尔)打网球时，我提到哈佛没有人研究蛋白质晶体学是多么不幸。manbet手机版相反，他说，“上校”，作为manbet手机版比尔以至于manbet手机版(图3B)被他的学生和博士后引用，因为他来自肯塔基州，有一个小组正在研究牛羧基肽酶a (CPA)的晶体结构。manbet手机版不久之后，我去了上校的办公室，有点紧张，因为(幸运的是)我已经被另一位教员拒绝了，我想和他预约见面。manbet手机版他站在他秘书的办公室里，秘书不在。当我问他是否可以约个时间见他时，他直接邀请我进去。manbet手机版在他描述完CPA项目后，我兴奋地问我是否可以加入这个项目，他说可以。manbet手机版所以，我刚刚得到了加入上校军队的绝佳机会，剩下的都是历史了。

manbet手机版CPA团队当时有5名博士后，其中Martha Ludwig对我的培养是最重要的。manbet手机版我和她一起对CPA的底物和抑制剂复合物进行了结构研究，也和整个小组一起对载波蛋白的晶体结构进行了测定。manbet手机版我记得有一次我们用希尔格-瓦茨线性衍射仪在一周内成功收集了5000个反射时，我很兴奋。manbet手机版现在，当然，我们可以在一小时内从核糖体的核糖体晶体中收集500万个反射(对于一个大80倍的组装来说，大约快105倍)。manbet手机版所有的计算机程序都是用Fortran语言为一台IBM 7094计算机编写的，这台计算机有32k的内存，没有磁盘，使用计算机卡。manbet手机版后者的好处是，我们可以把用过的卡片保存起来，作为废纸出售，以支持每隔几个月的实验室聚会。manbet手机版(我一直认为我们应该写一个叫做GENCARD的程序来增加聚会的频率。)

manbet手机版由于上校召集的优秀团队和他鼓励的管理风格，项目进展顺利。manbet手机版1966年，我们发表了一个6 Å分辨率的地图，包括一个多肽骨架的模型，我过于乐观地构建了它，但显示了它的许多结构特征。manbet手机版Martha和我，以及博士后Flo Quiocho，发表了一种抑制剂复合体的低分辨率地图，显示了底物诱导构象变化的第一个例子。manbet手机版1967年，我们获得了一份极好的apo-CPA的2.0分辨率电子密度图，我现在回想起来，这使我们能够正确地定位多肽主干的每一个残基，即使是在没有氨基酸序列的情况下。manbet手机版1967年，CPA与另外三种蛋白质RNase A、RNase S和糜蛋白酶并列，成为肌红蛋白和溶菌酶之后确定的第三种高分辨率蛋白质结构。

manbet手机版与今天的pi不同，上校几乎从不缺席实验室参加会议和出席研讨会。manbet手机版然而，他确实去英国休假了，在他离开的这段时间里，我想到了用直接的方法来抵消F_{manbet手机版导数}manbet手机版- f_{manbet手机版本地的}manbet手机版为了计算一个投影差分傅里叶图，它清楚地显示了重原子的位置。manbet手机版他回来后，我给他看了我写的论文，他同意我在manbet手机版学报manbet手机版．manbet手机版没有他作为合著者，这在今天的pi中也不常见。

manbet手机版上校安排我在蛋白质戈登会议上做演讲，这次会议由弗雷德·理查兹主持，于1966年夏天召开，后来证明他为我提供了一个极好的机会，对我未来的教员工作机会产生了重要影响。manbet手机版我讲了CPA结构和底物或抑制剂结合产生的构象变化，诱导配合的概念。manbet手机版Dan Koshland是一个参与者，他非常欣赏这个新的实验证据，为他的底物诱导构象变化的假设。manbet手机版我想，我的谈话和见到他的机会在一定程度上促使他主张伯克利生物化学系面试我，并给我提供一个教职职位，他们照做了，我在1967年春末接受了。manbet手机版1970年，由于系里不愿意雇用一位女性(琼)担任教员，我在伯克利担任教员两个月后辞去了教职，接受了耶鲁大学弗雷德·理查兹提供的职位。

manbet手机版剑桥大学分子生物学实验室
manbet手机版从哈佛毕业到伯克利之前，我在剑桥的MRC分子生物学实验室工作了3年，从1967年到1970年，在David Blow的团队中工作。manbet手机版他是希拉里·缪尔黑德(Hilary Muirhead)推荐给我的，她是上校的博士后，曾是马克斯·佩鲁茨的学生。manbet手机版在大卫的实验室里，我和理查德·亨德森(Richard Henderson)一起确定了凝乳胰蛋白酶与底物的结构。

manbet手机版剑桥分子生物学实验室是一个完全独特而杰出的实验室。manbet手机版它激励和培养了一大批来自美国的分子和结构生物学博士后，他们回国后改变了美国的这些领域。也许这个实验室最显著和独特的特点是位于顶层的食堂，早上提供咖啡，中午后提供午餐，下午提供茶。manbet手机版吸引人的绝对不是“香肠”或“洞里的蟾蜍”或其他烹饪机会，而是与随机的实验室主任、博士后和研究生坐下来讨论科学。manbet手机版这家餐厅是马克斯创办的，由他的妻子吉塞拉经营。manbet手机版我刚来的时候，餐厅太小了，每次我排完食物队，都只有几个空座位。manbet手机版因此，我不得不坐在一张可能有麦克斯，manbet手机版弗朗西斯·克里克manbet手机版而且manbet手机版悉尼布伦纳manbet手机版(图3E)以及博士后和学生。manbet手机版在大约两个月的时间里，我几乎见到了整个实验室的所有人。manbet手机版他们的谈话总是关于科学和实验，从不谈论某人前一天晚上看的电影。manbet手机版每个人都提出了建议和/或批评。manbet手机版起初我很好奇，既然他们在食堂花了那么多时间，他们是如何完成实验的，后来我意识到，大量的讨论减少了不明智或不必要的实验的数量，增强了好的实验。

manbet手机版没有每周的小组会议，但是LMB的每个人都有一个为期一周的年度会议，通常被称为“克里克周”。manbet手机版弗朗西斯会坐在第一排，经常问很多问题。manbet手机版我记得有一次manbet手机版弗雷德·桑格manbet手机版在介绍他最近的研究时，弗朗西斯跳起来说:“弗雷德，如果你做了(这个)和(这个)和(这个)，那么你就能发现(那个)和(那个)。”manbet手机版弗雷德没有把手从黑板上拿开，转身对弗朗西斯说:“够了，弗朗西斯，够了;manbet手机版你明白了”，然后继续说下去。manbet手机版由于克里克周包含了广泛的分子和结构生物学主题，前排的主任们会问我们许多人不愿问的问题，这是非常有用的。manbet手机版在一节比较真核生物和原核生物过程的课上，马克斯问道:“什么是真核生物和原核生物?manbet手机版，这些术语刚刚开始被使用。manbet手机版我很高兴马克斯问了这些问题，因为我根本不知道这些术语是什么意思。manbet手机版悉尼·布伦纳(Sydney Brenner)会在周六上午10点半左右的时候在实验室的洗碗厨房里准备咖啡，他总是和他和弗朗西斯指导的分子生物学层的博士后和学生们在一起，还有我们这些想顺便拜访的人。manbet手机版西德尼总是滔滔不绝地谈论一些有趣的话题，有很多有趣的故事和“俏皮话”。

manbet手机版我从克里克周(Crick week)、食堂、周六咖啡和大厅里的随意交谈，以及晚上去酒吧“最后一次拜访”(美国博士后们就是这么做的)，了解了LMB所追求的所有主要研究问题。manbet手机版(英国人晚上大多不在那里。)manbet手机版正是在这个时候，我产生了兴趣，试图理解“克里克中心法则”中涉及的许多蛋白质和核酸执行其功能的机制的结构基础:DNA如何复制成DNA, DNA如何转录成RNA，最后RNA如何翻译成蛋白质。

manbet手机版在剑桥，使用计算机设备是极其有限的。manbet手机版LMB使用的是剑桥大学天文系的计算机，在5个工作日内，我们每天只被允许提交两份报告，而且晨跑的时间不能超过两分钟。manbet手机版我会一遍又一遍地检查我提交的电脑卡片，以尽可能多地消除错误，因为否则这周我将失去10个机会中的1个。manbet手机版回想起来，我们能够完成任何事情都是令人惊讶的。manbet手机版当然，时间尺度更长。

manbet手机版在我二年级的某个时候，Brian Hartley(图3C)找到我，问我离开LMB去伯克利后打算做什么研究项目，他当时正在和David Blow合作进行凝乳蛋白酶的研究。manbet手机版我说我想解决氨酰tRNA合成酶的结构，最终与包括tRNA在内的底物复合。manbet手机版在这个步骤中，一个特定的氨基酸被连接到含有正确反密码子的tRNA上。manbet手机版布莱恩拍着我的背说:“好了，好了，我的孩子。manbet手机版这是一个有趣的问题，但你必须做一些你真正能成功做的事情。manbet手机版我建议你研究一下己糖激酶的结构。”manbet手机版我感谢他的建议，跑到图书馆去查己糖激酶是什么。manbet手机版随后，我通过阅读Dan Koshland的论文(图3D)了解到，己糖激酶反应是他解释某些酶必须经历底物诱导的适合构象变化的主要例子。manbet手机版他推理道，如果这种酶是刚性的，它的所有催化基团都正确地定向于催化葡萄糖的六羟基对ATP的磷酸的亲核攻击，那么为什么在没有葡萄糖的情况下水不能水解ATP呢?manbet手机版六羟基毕竟是一个连着碳的水分子。 He hypothesized that the binding of glucose must cause a conformational change in the enzyme that is necessary for catalysis. I consequently started growing crystals of hexokinase at Cambridge and spent the next 10 years studying this enzyme. Mentorship is always essential, and not only from your direct supervisor.

manbet手机版1969年，我向NIH提交了我的第一份拨款申请，我在申请中提出确定酵母己糖激酶的结构，我成功地生产出了结晶学上合适的晶体。manbet手机版我必须去伯克利参加一个NIH小组的现场访问，一个小组成员问我将如何收集x射线数据。manbet手机版我说用衍射仪，然后我被告知用衍射仪收集数据是行不通的，因为我的己糖激酶晶体的单位细胞尺寸太大了(一个维度是200 Å)。manbet手机版当然，这是一个荒谬的评论，因为一个人只是把探测器移到离水晶更远的地方，但审查员很坚决，最终我的第一个申请被拒绝了。manbet手机版(几十年后，这位评论家在电梯里问我，我们是如何解决己糖激酶的结构的，我说“用衍射仪收集数据”。)

manbet手机版1969年底或1970年初的某个时候，弗雷德·理查兹(图4D)正在参观LMB，我有机会和他交谈。manbet手机版由于我开始担心我在伯克利的资金问题，我问他是否有可能为我在耶鲁找到一个教员职位，他说他会研究一下，然后给我答复。manbet手机版多年后，我在国王学院与悉尼·布伦纳共进晚餐时，从他那里得知，弗雷德在与我交谈后跑到他的办公室，问他是否可以鼓励悉尼实验室的另一位美国博士后接受或拒绝耶鲁大学的录取通知书。manbet手机版西德尼立即把博士后叫到办公室，关上门，在桌上放了一张纸，告诉博士后，除非他给弗雷德写了一封接受或拒绝耶鲁录取的信，并在信上签字，否则他不能离开房间。manbet手机版悉尼随后把拒绝耶鲁录取的信交给了弗雷德，弗雷德离开剑桥时，囊中有两个教职职位。manbet手机版弗雷德想提供两个职位，因为系里有些教员想雇用琼。也许弗雷德认为，如果耶鲁给我们俩提供工作，会比伯克利更有优势。manbet手机版事实上，事实证明这是真的。

manbet手机版耶鲁大学
manbet手机版我在1970年的深秋来到耶鲁，开始了我们的酵母己糖激酶的结构研究，有和没有底物葡萄糖结合的酵母己糖激酶，这个项目在20世纪70年代占据了我实验室的大部分精力。manbet手机版我非常幸运，在耶鲁大学的第一年，Robert fretick加入了我的实验室，作为我的第一个博士后研究己糖激酶。manbet手机版鲍勃来耶鲁和哈尔·威科夫一起做博士后，并获得了奖学金。manbet手机版他决定换实验室，哈尔也很配合。manbet手机版我们研究的葡萄糖结合和无葡萄糖结合的己糖激酶结构显示了当时所观察到的单个亚基中最大的构象变化，并清楚地证明了Koshland的诱导匹配假说是正确的，可以解释己糖激酶的特异性。manbet手机版与我实验室的其他工作相比，有和没有葡萄糖结合的己糖激酶结构的图片在教科书上发表的次数要多得多。manbet手机版布莱恩·哈特利当然对我应该追求的研究方向提出了很好的建议，我只能想，如果我没有在走廊上与哈特利讨论己糖激酶，我会在20世纪70年代取得什么样的成就。

manbet手机版从20世纪70年代开始，耶鲁结构生物学的质量之所以如此优秀，一个非常重要的因素是共享计算和x光设备，即“核心”实验室，以及它促进的许多相互作用。manbet手机版当我1970年到达时，弗雷德·理查兹和哈尔·威科夫(他们在1967年解决了RNase S的结构)有一个共享的x光和计算实验室，我加入了这个实验室并增加了一些设备。manbet手机版1975年，我向弗雷德建议，我们应该考虑申请NIH项目拨款，这是我刚刚了解到的，以支持我们的结构生物学研究。弗雷德带头组织了我们五个人，WERMS小组(Wyckoff, Engelman, Richards, Moore和Steitz)，我们在1976年申请成功。manbet手机版我们所说的“WERMS”拨款，现在已经34年了，但我是唯一一个留下来的WERM。manbet手机版在20世纪80年代末，来自HHMI的资金为核心x射线和计算实验室提供了额外的支持，包括两个技术人员职位和额外的设备。manbet手机版他们还为我提供了一个调查员职位，并为MB&B系提供了额外的教员/调查员职位。在20世纪90年代中期，WERMS小组还包括保罗·西格勒、阿克塞尔Brünger和manbet手机版詹妮弗Doudnamanbet手机版(图4)。

manbet手机版图4。manbet手机版1995年我们开始研究核糖体时，耶鲁结构生物学中心的教员们。manbet手机版上面是HHMI调查员(A) Jennifer Doudna， (B) Paul Sigler和(C) Axel Brünger，从左到右，底部(D)是2001年的WERMS小组:Hal Wyckoff, Fred Richards，我和Peter Moore，从左到右，在后排，前面的Don Engelman。

manbet手机版这七个实验室组成了耶鲁结构生物学中心(CSB)，弗雷德·理查兹被耶鲁大学校长任命为CSB的首任主任。manbet手机版共享的核心计算和衍射实验室总是充满了学生、博士后和技术人员的活动，他们相互交流，帮助对方解决问题。manbet手机版在20世纪90年代中期，核心实验室有6名技术人员帮助用户解决他们遇到的问题，而CSB实验室有大约100名博士后、学生和技术人员。manbet手机版1995年(我们开始核糖体研究的时候)CSB的七名教员现在或曾经在美国国家科学院工作。manbet手机版在90年代中期，这七个实验室和它们广泛的相互作用提供了可能是世界上最好的环境来进行结构生物学研究，特别是确定核糖体的结构。

manbet手机版儿子乔恩
manbet手机版我们的儿子乔恩出生于1980年，在他4周大的时候，他在MRC LMB的庆祝活动上遇到了他的第一个诺贝尔奖得主弗雷德·桑格，那是弗雷德第二次获得诺贝尔化学奖。manbet手机版那天我们在参加完瑞士、德国和伦敦的会议后，碰巧在剑桥。manbet手机版在接下来的15年里，乔恩参加了世界各地的许多会议，直到棒球占领了他的世界。

manbet手机版乔恩上小学的时候，我就开始和他打网球和棒球，还在车库为他安装了一个篮球框。manbet手机版夏天的每个周末，我们都会去家乡石溪村的棒球场练习他的投球、接球和击球技巧。manbet手机版这一直持续到他开始把球打到公园外的盐沼草地上。manbet手机版高中时，他在橄榄球队当了四年的四分卫，在篮球队当了四年的后卫，在棒球队当了四年的投手。manbet手机版大四结束时，他在棒球选秀的第44轮中被选中，但他明智地选择了去耶鲁。manbet手机版在耶鲁大学，他主修分子生物物理学和生物化学，主修棒球，他的两个同学和队友克雷格·布雷斯洛和马特·麦卡锡也主修棒球。manbet手机版大三结束时，乔恩在第三轮被密尔沃基酿酒人队选中(讽刺的是)，并获得了比我在2009年诺贝尔奖中所占份额略高的签约奖金。manbet手机版在一次肩膀受伤导致他离开棒球后，他去了耶鲁大学法学院，现在在麦肯锡公司从事咨询工作。manbet手机版布雷斯洛本科时曾在琼的实验室工作，并打算去医学院，他也被酿酒人队选中，现在是奥克兰运动家队的投手。

manbet手机版图5。manbet手机版1997年11月的感恩节假期，我和儿子乔恩在犹他州雪鸟附近的阿尔塔滑雪道滑雪。

manbet手机版琼恩通过我们现在所说的“Riboski”之旅学会了滑雪。manbet手机版从80年代末开始，一群以rna为中心的朋友和他们的孩子开始每年一起去滑雪旅行:汤姆和卡罗尔manbet手机版切赫manbet手机版(+ 2);manbet手机版吉姆和埃尔斯贝特·达尔伯格(+2);manbet手机版John Abelson (+1)， Olke和Lori Uhlenbeck。manbet手机版因为我们让孩子们去上滑雪课，而大人则一起滑雪，乔恩很快就进步了，到12岁时，他就能绕着我滑几圈了。manbet手机版也许我最难忘的滑雪之旅是在乔恩上高中的时候，我在感恩节假期和他一起去犹他州的雪鸟滑雪的两次4天之旅(图5)。他会在双黑钻雪道滑雪，而我则会在双蓝钻或黑钻雪道滑雪，我们会在滑雪缆车的底部相遇。

manbet手机版克里克的中心教条的结构基础manbet手机版分子生物学
manbet手机版从1981年我们建立了只有cAMP结合的分解产物基因激活蛋白(CAP)的结构开始，我们对大分子进行DNA制造DNA制造RNA制造蛋白质的机制进行了长达几十年的探索，这是克里克的核心信条。manbet手机版这是DNA结合蛋白的第一个结构，一种转录激活物。manbet手机版我们在1991年发现的CAP与DNA结合的结构显示了DNA主干的显著弯曲，而我们最近发现的非配体CAP结构显示了DNA结合域的巨大构象重排，这解释了cAMP的结合是如何激活CAP与DNA结合的能力的。

manbet手机版在20世纪80年代，我们还确定了DNA聚合酶的第一个结构，DNA聚合酶I的Klenow片段(它的发现是由manbet手机版阿瑟·科恩伯格manbet手机版导致他获得了诺贝尔奖)和它与3 ' -5 狗万世界杯'外切酶活性位点上的DNA底物的复合物。manbet手机版底物复合物的结构使我们发现了磷酸化转移反应的双金属离子机制，我们后来提出，这种机制被许多核酶采用，最近证明了其中几种核酶的情况。manbet手机版我们还发表了我们的第一个位点特异性重组酶片段的结构，gamma delta resolvase，缺乏其序列特异性DNA结合域。manbet手机版也许在80年代末最令人兴奋的飞跃是我们获得了谷氨酰胺-tRNA合成酶与tRNA复合物的结构^{manbet手机版Gln}manbet手机版和ATP。manbet手机版这是我20年前就想解决的问题，当时布莱恩·哈特利(Brian Hartley)明智地建议我，现在解决这个问题还为时过早。manbet手机版显然，他是对的。manbet手机版合成核糖核酸复合体的第一个结构显示了合成酶如何识别含有谷氨酰胺反密码子的正确tRNA，并识别所有其他的tRNA。manbet手机版这是将遗传密码转化为蛋白质的第一个关键步骤。

manbet手机版在20世纪90年代的上半叶，我们在寻求核心教义方面取得了许多令人兴奋的进展。manbet手机版我们获得了HIV逆转录酶与非核苷酸抑制剂复合物的第一个结构，这是当时用于治疗艾滋病患者的少数药物之一。manbet手机版我们还确定了T7 RNA聚合酶的许多结构中的第一个，我们在过去15年里获得了它的许多功能状态。manbet手机版这是我们探索DNA如何转录成RNA的开始，从T7 RNA聚合酶与启动子结合的起始状态开始，然后进入延伸和终止状态。manbet手机版我们在DNA重组方面的研究也取得了重大进展。manbet手机版我们获得了第一个参与同源重组的酶的结构recA，以及与其特异DNA靶结合的位点特异性重组酶的结构gamma delta resol花瓶。manbet手机版虽然后一种结构阐明了resol花瓶如何识别它的DNA目标，但它并没有揭示蛋白质如何将两个DNA双工链聚集在一起形成突触复合体或如何完成链交换;manbet手机版那还得再花10年。manbet手机版我们还得到了一个DNA聚合酶(Klenow片段)的第一个二元复合体的结构，它的双DNA底物与聚合酶活性位点结合，但没有进入的dNTP。

manbet手机版到1995年，除了最后一个——核糖体合成蛋白质之外，我们在对中心原理的所有步骤的机制的结构洞察上取得了重大进展。manbet手机版就在1995年秋天的这个时候，Nenad Ban加入了实验室，他说他想研究核糖体的结构——合适的人在合适的时间。manbet手机版如更详细讨论在manbet手机版诺贝尔演讲manbet手机版我们与Peter Moore和Ban合作，后来paul Nissen和Jeff Hansen加入。manbet手机版在1995年到2000年期间，我们的目标是获得50S核糖体亚基的结构和一个具有过渡态中间体的复合物，这三名博士后的swat团队成功地实现了这一目标(图6)manbet手机版Haloarcula marismortuimanbet手机版50亚基和与肽基转移酶中心结合的抗生素形成了我们创立Rib-X Pharmaceuticals, Inc.的基础。manbet手机版随后，研究生Martin Schmeing在21世纪初对底物复合体结构进行了研究(图6)。在20世纪90年代，我们的小核糖体小组每天都在午餐桌旁进行对话和定期会议，讨论进展和前进的想法。manbet手机版2000年初计算2.4 Å分辨率的电子密度图和我们建立核糖体模型的几个月是我经历过的最令人兴奋的研究时期。manbet手机版我们不知道核糖体的结构，特别是RNA的结构是什么样的，而观察它的内部结构简直令人惊叹

manbet手机版图6。manbet手机版2009年12月9日，在斯德哥尔摩的北欧博物馆，一些核糖体项目的关键团队成员正在接受诺贝尔基金会的接待。manbet手机版从左至右分别是保罗·尼森、我、佩吉·埃瑟顿、彼得·摩尔、内纳德·班、马丁·施明和杰夫·汉森。manbet手机版Peter是我在核糖体项目上的长期同事，朋友和合作者。manbet手机版paul和Nenad是实验室的前博士后，他们主要负责确定50S亚基的结构。manbet手机版Jeff曾是一名博士后，主要贡献包括抗生素和底物中间类似物的50亚基的结构。manbet手机版Martin曾是一名研究生，他在催化的不同步骤中捕获了许多底物类似复合物的结构，这使他能够在50S亚基上制作肽键形成的电影。manbet手机版佩吉担任我的行政助理25年了，一直是实验室人员的辅助人员、记忆芯片和协调者。

manbet手机版回顾我在科学领域的发展和进步，我意识到良好的导师关系在一个人的职业发展的早期阶段是多么的重要，在研究的各个阶段都能与同事进行面对面的交谈、辩论和讨论。manbet手机版杰出的发现、见解和发展不会发生在真空中。manbet手机版我们在大核糖体亚基及其众多复合体结构方面的研究成果，在20世纪90年代耶鲁大学的结构生物学环境以及霍华德·休斯医学研究所(Howard Hughes Medical research Institute)对高风险项目的长期支持下，得到了极大的加强和加速。manbet手机版当我看到越来越多的教职员工、学生和博士后之间几乎只通过电子邮件交流，而不是在午餐桌上讨论想法(就像我在剑桥和耶鲁最初几十年的经历一样)，我想知道他们在进行科学研究时是否会像面对面接触时那样富有创造力和乐趣。

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