manbet手机版Wmanbet手机版1939年，我13岁的时候离开了我的出生地——纽约布鲁克林。manbet手机版在我就读的公立学校——第134公立学校，我很喜欢那里的民族多样性和有趣的学生。manbet手机版我家附近的孩子只在游戏中竞争，尽管不友好的帮派倾向于定义我们社区的界限。manbet手机版我记得主要的课外活动是在学校操场上的胜利花园，我们为战争做出的贡献，以及我们最喜欢的一项运动——手球，我们在公寓的墙壁之间玩。

manbet手机版母亲埃拉·格林沃尔德(Ella Greenwald)是美国人，出生在一个有一个姐姐和四个兄弟的家庭，他们都出生在匈牙利。manbet手机版父亲哈里·罗伊兹(Harry Royze)有两个兄弟和一个姐姐，来自俄罗斯的敖德萨地区。manbet手机版格林沃尔德一家和罗斯一家是世俗的犹太人，孩子们更是如此，尽管我和弟弟为了取悦罗斯爷爷，曾在希伯来语学校待过一段时间。

manbet手机版由于我哥哥患有风湿热，我们全家被建议搬到气候炎热干燥的华盛顿州斯波坎市，我母亲的姐姐在那里有一个舒适的家，可以容纳我们。manbet手机版这让我父亲留下来照顾他的地板生意，我一直不理解这种安排，也觉得很矛盾。manbet手机版父亲来探望的次数很少。manbet手机版战争还在继续。manbet手机版母亲在斯波坎市的海军供应站做秘书工作，那时我们两个孩子正在斯波坎的学校系统上学。

manbet手机版夏天我在当地一家医院工作，主要是帮助精神科病房。manbet手机版后来，我发现自己从事的职业与解决医疗问题有关。manbet手机版我们家没有人从事研究工作。manbet手机版亚瑟·g叔叔是一位出色的小提琴家和艺术家，曾在布鲁克林的一所职业学校教授橱柜制作。manbet手机版如果不是经济萧条导致戴夫叔叔进入美国国税局，他本可以成为一名律师。manbet手机版在我的圈子里，没有人能给我建议。

manbet手机版起初，我认为关于大脑如何工作的问题是最有趣的。manbet手机版但当我进入华盛顿州立学院时，我必须实际一点，把注意力集中在不那么晦涩的事情上。manbet手机版此外，学校没有开设神经生物学课程。manbet手机版然而，我受到赫伯特·伊斯特里克教授的强烈影响，他鼓励他的动物学学生为自己设立高标准，然后在海军短暂服役后去了芝加哥大学。manbet手机版我的博士论文问题是确定如果饮食中含有B12，大鼠组织的DNA含量是否会增加。manbet手机版这个问题是我的导师提出的，他观察到胸腺嘧啶可以取代乳酸菌中的维生素B12。manbet手机版我分析了喂食B12含量不同食物的大鼠组织的DNA。manbet手机版当DNA的遗传特性被揭示时，这个项目注定要失败，我发现每个肝脏细胞的DNA含量与饮食无关^{manbet手机版1}manbet手机版．

manbet手机版博士的工作。manbet手机版我不得不想出一个新的论文项目。manbet手机版急于弥补失去的时间，我从大一生物化学课堂笔记中挑了一道题。manbet手机版帕特南/埃文斯小组对确定大肠杆菌中合成的噬菌体的核酸成分的起源很感兴趣，弗兰克·帕特南的讲座描述了Hammarsten、Reichard和Saluste的实验^{manbet手机版2}manbet手机版背景信息。^{manbet手机版15}manbet手机版n -胞嘧啶，游离基，已被发现没有并入DNA^{manbet手机版15}manbet手机版n -胞苷被纳入大鼠肝脏DNA。manbet手机版很明显，我想问是否有可能直接利用整个胞苷，核糖和所有，在脱氧胞苷的生物合成。manbet手机版这将令人震惊。manbet手机版2004年在斯德哥尔摩的一次会议上，我从彼得·里查德那里得知，出口到瑞典的^{manbet手机版14}manbet手机版c化合物在当时是被美国原子能委员会禁止的，否则他们肯定会做明显的后续实验，使用统一的U-^{manbet手机版14}manbet手机版C标记胞苷本身。

manbet手机版我从manbet手机版眼虫属股薄肌manbet手机版生长在^{manbet手机版14}manbet手机版有限公司_{manbet手机版2}manbet手机版．manbet手机版我必须确定糖和碱基的独立比活性我通过核苷磷酸化酶和次黄嘌呤处理核苷来交换待分析的碱基。manbet手机版然后通过纸层析法，使用含有硼酸盐的介质来阻碍核苷的迁移，我还可以分离出脱氧肌苷和胞嘧啶。manbet手机版尽管U -^{manbet手机版14}manbet手机版C胞苷没有标记的脱氧核糖manbet手机版大肠杆菌manbet手机版DNA，我发现老鼠器官DNA的脱氧胞苷几乎是一致标记的。manbet手机版的^{manbet手机版14}manbet手机版C含量远远超过嘌呤核苷酸中可忽略的放射性^{manbet手机版3.}manbet手机版．manbet手机版因此，根据这两种标准，似乎可以肯定^{manbet手机版14}manbet手机版C直接从胞苷到达脱氧核糖。manbet手机版Reichard用U-重复并扩展了这个实验^{manbet手机版14}manbet手机版C尿苷1957年，脱氧胞苷和胸苷的结果基本相同^{manbet手机版4}manbet手机版．

manbet手机版我毕业后尝试研究核糖核酸还原的酶学是合理的。manbet手机版来自瑞典的耶鲁大学博士后Peter Reichard问我的打算。manbet手机版但在我职业生涯的早期阶段，我并不急于处理一个英勇的问题。manbet手机版我对学习更多关于酶学的原理很感兴趣。

manbet手机版1950年在芝加哥。

manbet手机版立体化学在芝加哥manbet手机版．manbet手机版实际上，Ogston在1948年的论文中提出，酶-底物复合物能够区分四面体碳上相同的基团，是该复合物不对称的结果^{manbet手机版5}manbet手机版这个问题在1950年的芝加哥化学/生物化学学界引起了激烈的争论，当时酶还是一个黑盒子，重点是底物变化的化学。manbet手机版特别是奥格斯顿的观点可以证明迈伦·本德在芝加哥大学的化学课上所做的实验的结论，即没有酯的背标^{manbet手机版18}manbet手机版酶解过程中的o -水不能排除为四面体中间体。manbet手机版本德已经证明了酯在碱中水解时发生反标记^{manbet手机版6}manbet手机版．manbet手机版在基于奥格斯顿的酶促反应中人们会期望失去所有的^{manbet手机版18}manbet手机版O在这种中间体的立体定向返回到酯上。manbet手机版这些想法在1976年演变成了同位素位置交换的想法。

manbet手机版1997年在福克斯大通。

manbet手机版因此，我受到了挑战，要建立酶促反应的绝对立体化学，并确定其机制意义(如果有的话)。manbet手机版这似乎并不是一项艰巨的任务，尽管直到1963年肯尼斯·汉森和我才解决了柠檬酸的前手性这一具有历史意义的问题^{manbet手机版7}manbet手机版，这对我获得一个正确的角度对联合水合酶反应是必要的。

manbet手机版耶鲁大学。manbet手机版1955年，在西储大学和c·e·卡特一起获得博士后学位后，在纽约大学和manbet手机版维罗奥乔亚manbet手机版我有幸被约瑟夫·弗鲁顿邀请成为耶鲁大学医学院生物化学讲师。manbet手机版在耶鲁的第一年有以下三个方面的发展。manbet手机版由于不愿意花时间让系里的质谱仪正常工作，我转向了西摩·利普斯基(Seymour Lipsky)医学院实验室里的闪烁计数器。利普斯基是一位热衷于探索和开发新方法的医学博士。manbet手机版最早的仪器之一来自纽黑文的一家初创小公司，利普斯基一直在鼓励这家公司——技术仪器公司。manbet手机版利普斯基也有一个氚化水的样本，这和他的计数器一起让我开始了我想做的实验。

manbet手机版图1。manbet手机版果糖-6- p由葡萄糖-6- p在水和D2O中形成，酮类用Roe比色法测定。

manbet手机版我在耶鲁大学第一年的第二件大事是从梅尔·辛普森(Mel Simpson)那里得知，他的论文显示，在肝脏切片系统中，蛋白质分解明显需要ATP。manbet手机版这一观察结果需要进一步的研究，我在接下来的20年里一直在做这方面的兼职。

manbet手机版但1954-1955年最重要的事件是我向系里的研究生泽尔达·布登斯坦求婚。manbet手机版幸运的是，我在她毕业前找到了她。manbet手机版她的母亲，从泽尔达五岁起就守寡了，来和我们住在一起。manbet手机版在我们即将到来的四个孩子身上，她得到了很多爱和帮助。manbet手机版她使泽尔达有了研究生涯，经常与我平行，直到1987年她退休，全身心投入到她的和平和社会兴趣。

manbet手机版Aldose-ketose异构酶。manbet手机版1954年到1963年，我在耶鲁大学的9年里，最有趣的实验可能是它发展的方式，以及它给我的信心，我也许终究能够做研究。manbet手机版我一直在寻找催化醛糖-酮糖相互转化的酶中质子转移的证据。manbet手机版我们错误地没有发现后来在三糖P异构酶反应中检测到的少量转移。manbet手机版Y.J. Topper曾报道D_{manbet手机版2}manbet手机版O形成葡萄糖-6- p (G6P)含有约一个氘使用钡盐结晶作为G6P陷阱^{manbet手机版8}manbet手机版这表明这种酶的反应物之间可能没有质子转移。manbet手机版显示某些转移的重要性在于它将为催化过程提供线索。manbet手机版完全转移意味着氢化物转移。manbet手机版完全交换意味着碳离子中间体，但不会涉及酶作为碱。manbet手机版然而，如果被抽离的质子在第二次质子转移之前进行一定程度的交换，则会同时发生转移和交换。manbet手机版这样的结果意味着一个单一的碱基机制。manbet手机版目前还没有这样的结果报告。manbet手机版在不相关的实验中，我观察到G6P异构酶的一个令人困惑的现象。manbet手机版当G6P与D_{manbet手机版2}manbet手机版O果糖-6- p的比色分析在达到最终值之前经过一个最大值。manbet手机版这种过度平衡只发生在D_{manbet手机版2}manbet手机版O，图1，非常令人费解。

manbet手机版图2。manbet手机版证明氚转移在F-6-P->G-6-P。

manbet手机版化学系的Julian Sturtevant教授很明智地问我是否确信自己的假设。manbet手机版我很快就发现托普的实验可能是有误导性的。manbet手机版也许他的G6P钡阱不够好。manbet手机版如果D区同时有换乘和兑换_{manbet手机版2}manbet手机版然后，当产物回到酶中，会有另一个交换机会，直到产物完全交换。manbet手机版果糖- p会从最初的部分H型转变为C-1的全部d型。manbet手机版现在，要使我的奇怪结果有意义，唯一需要做的就是找到酮类在酸中的显色反应中的同位素效应。manbet手机版当用不同的方法测定20小时时，发现等量的果糖-6-磷就证明了这一点^{manbet手机版9}manbet手机版．

manbet手机版表1。manbet手机版2R和2S异构酶的立体化学过程。

manbet手机版我们可以显示使用1-T果糖-6- p的转移与使用Ba的异构酶形成G6P的晶体盐，因为它在少量种子晶体中形成，图2。manbet手机版由G6P合成的6Pgluconate只标记在C-2，即发生转移的部位。manbet手机版我们还发现转移发生在同一分子的碳之间，并且在低温下转移的程度最大，说明热对中间产物E-T的解离作用最大。manbet手机版提出的中间体，EH。manbet手机版戊二醇- p的正向和反向分配基本相等，这可以从T-water早期在产物和底物中相等的掺入看出。manbet手机版产物的较低的比活度与中间体的缓慢交换相一致，这也可以预期显示出对溶剂的T的一些区别。manbet手机版由于在氚化水中只有一个T进入果糖- 6p的C-1位置，因此与溶剂的提取和交换具有立体特异性。manbet手机版1-的绝对立体化学^{manbet手机版2}manbet手机版h -果糖- 6p是由Fox Chase的Lindo Patterson提出的中子衍射结晶学严格建立的^{manbet手机版6}manbet手机版单氘乙二醇酸锂盐^{manbet手机版10}manbet手机版．manbet手机版这是利用中子衍射建立由同位素取代而成的不对称分子的绝对构型的第一个例子。

manbet手机版所有异构酶都使用顺式烯二醇中间体。manbet手机版如表1所示，对2r -醛糖有特异性的异构酶被发现可以激活生成的酮糖的1- r质子。manbet手机版针对2s -醛糖的异构酶产生酮糖，酮糖交换1S质子^{manbet手机版11}manbet手机版．manbet手机版如果这些质子转移是分子内的，那么它们都来自烯二醇中间产物的同一面。manbet手机版这意味着顺式烯二醇中间体。manbet手机版顺-烯二醇中间体的优点是只需要一个亲电试剂即可使任一底物的羰基极化。manbet手机版对一个碱基和一个亲电试剂的需要可能是在进化中保持顺-烯二醇机制的一个主要因素。

manbet手机版图3。manbet手机版关闭环，给b-甘露糖-6- p。

manbet手机版顺烯二醇作用机制与异构酶异位特异性的关系。manbet手机版开链形式的糖在水平衡中是次要的物种。manbet手机版因此，对于任何戊糖或己糖底物，开环步骤都是由异构酶催化的第一步。manbet手机版由于闭环是开环的相反过程，我们想知道带有顺烯二醇中间体的酶是否会在环的闭环步骤中被定义。manbet手机版环的闭合应该发生在质子供体的对面。manbet手机版例如，如果质子从平面上方靠近C-3, C2-C3键将朝向平面下方，C5OH必须靠近正在生成的C-1羰基，从平面下方形成环状产物，如图3所示^{manbet手机版11 - 13}manbet手机版．

manbet手机版在我们持续到1973年的异构酶研究过程中，确定了5个异构酶的命名特异性。manbet手机版结果与预期一致，见表2。manbet手机版因此manbet手机版一个manbet手机版-木糖是2r -醛糖酶生产果糖6P+NH的底物_{manbet手机版3.}manbet手机版木质素，分别是manbet手机版bmanbet手机版- l -阿拉伯糖和b - d -甘露糖-6- p是2s -醛糖异构酶的特异性底物。

manbet手机版表2。manbet手机版异头specificties。

manbet手机版葡萄糖-6- p异构酶的特异性不寻常。manbet手机版符合上述考虑manbet手机版一个manbet手机版-G6P和manbet手机版一个manbet手机版-F6P是受欢迎的衬底。manbet手机版然而,异构化manbet手机版bmanbet手机版-G6P以显著的速率发生。manbet手机版有人提出，开链醛糖在酶上的C2-C3键在环关闭前发生扭转反转。manbet手机版这种运动如果发生在G6P的烯二醇中，则可将C-2质子加到翻转面上，生成甘露糖-6- p。manbet手机版Seeholzer报道了G6P异构酶激活甘露糖-6- p的C-2质子^{manbet手机版14}manbet手机版．

manbet手机版环形面命名法^{manbet手机版15}manbet手机版．manbet手机版在寻找一种方法来指定一个简单的环化合物的环面，如G6P，或核苷的两个环，或融合环化合物的环面，如甾醇，我们意识到可以设计一种通用的方法，使用标准化学手册中包含的已建立的环原子编号规则^{manbet手机版15}manbet手机版．manbet手机版一张脸被认为是manbet手机版一个manbet手机版如果看到有编号的环原子沿顺时针方向增加，否则这个面被指定为manbet手机版bmanbet手机版的脸。manbet手机版该方法不受环取代基变化的影响，如糖的D/L命名。manbet手机版用这种方法可以很容易地交流结构信息，而不需要借助图片。manbet手机版例如，注意到manbet手机版沃森克里克manbet手机版碱基配对配对的碱基在形成反平行双螺旋的过程中具有相同的面向，这告诉了我们构建正确结构所需要知道的很多东西。

manbet手机版福克斯蔡斯。manbet手机版1963年，我们搬到了费城福克斯蔡斯癌症中心的癌症研究所。manbet手机版根据我的经验，这个研究所是一个独特的地方。manbet手机版自成立以来，它一直遵循这样一种理念:要了解癌症，就需要对生物科学有更广泛的理解。manbet手机版在1949年从中心城市第一次扩展时，它的教员包括晶体学家、胚胎学家、化学家、生物化学家和医学生物学家，没有部门限制。manbet手机版吸引我的是，有机会从参加彼此研讨会的广泛研究人员那里学习，以及教学的自由。manbet手机版研究支持来自我们自己的竞争性补助金，但研究所有慷慨的历史帮助你度过难关。manbet手机版我们没有被要求去争取我们自己的工资，因为我们的工资来自NIH的核心拨款，这是第一个这样的拨款，它也支持机构设施。manbet手机版主任蒂莫西·r·塔尔博特(Timothy R. Talbot)医学博士根据一组工作人员和杰出的外部人士的建议做出了决定。manbet手机版泽尔达有自己的实验室和补助金。manbet手机版1987年，她放弃了科学，更积极地参与核冻结和其他和平努力。 In 1977 when Avram Hershko requested to share our lab space and facilities, he and his group were welcomed for the 22 years he was with us, either on sabbatical or during summers.

manbet手机版完整的细胞系统。manbet手机版在接下来的几年里，我开始了一系列的研究，利用同位素来研究新陈代谢的问题。manbet手机版哈兰德·伍德在西部自然保护区的研究小组观察到^{manbet手机版14}manbet手机版C-lactate或^{manbet手机版14}manbet手机版c -甘油喂给禁食动物时，肝糖原葡萄糖单位的标记是这样的，这表明三糖- p异构酶在合成过程中未能平衡其两个磷酸三糖底物，或FDP醛缩酶的缩合反应没有给FDP的两个半分子相等的标记。manbet手机版我们之前研究过后者，利用平衡同位素交换(可能是第一次)表明FDP的C456交换比C123更快^{manbet手机版16}manbet手机版．

manbet手机版由于三糖- p异构酶步骤不完全平衡导致的不对称标记似乎不太可能，因为这种酶具有很高的效率。manbet手机版这个问题得到了解决，因为伍德的研究小组证明了^{manbet手机版14}manbet手机版在异构酶反应中，有一个氘存在的c标记甘油在酶的不完全平衡所预测的方向上更大^{manbet手机版17}manbet手机版，这是我们之前展示的异构酶反应的一次同位素效应的表达。

manbet手机版耶鲁大学研究生Bob Kemp用1-T葡萄糖、1-T脱氧葡萄糖和3-T葡萄糖测定了肠系膜Leuconostoc mesenterides发酵和生长过程中还原吡啶核苷酸、NAPDH和NADH的命运。manbet手机版优先使用1-T生产乙醇和3-T生产乳酸表明脱氢酶产物的部分分离^{manbet手机版18}manbet手机版．manbet手机版来自葡萄糖6P脱氢酶的NADH也氧化2脱氧葡萄糖-6- p，是脂类溴合成的还原等价物的主要来源。

manbet手机版糖酵解的控制。manbet手机版在接下来的几年里，我们报道了关于人类红细胞中葡萄糖降解调节的研究。manbet手机版葡萄糖的运输是迅速的，所以第一个不可逆的步骤，己糖激酶，必须决定净通量的速率。^{manbet手机版14}manbet手机版使用亚甲蓝和肌苷来改变稳态G6P的c -葡萄糖利用率被证明与G6P水平呈负相关，超过40倍的范围，即使许多其他代谢物变化很大，但没有显示出对这种线性关系的影响^{manbet手机版19}manbet手机版．manbet手机版因此，任何影响红细胞葡萄糖利用率的条件都必须通过影响G6P或己糖激酶本身的活性来实现。manbet手机版Pi在刺激红细胞糖酵解方面的显著作用可以追溯到它干扰G6P与酶的结合，而自身对己糖激酶的速率没有影响^{manbet手机版20.}manbet手机版．

manbet手机版通过同位素交换率的测量，我们得出结论，在与高水平的正磷酸盐孵育的人类红细胞中，三糖- p中间体的积累是由于平衡，而不是速率限制步骤。manbet手机版2,3 -二甘油酸净合成引起的低水平的NAD和丙酮酸使糖酵解中间产物的平衡向高三糖- ps转移^{manbet手机版21}manbet手机版．

manbet手机版Glucose-1, 6 p_{manbet手机版2}manbet手机版的大脑。manbet手机版洛瑞manbet手机版et al。manbet手机版报告了通常数量可观的G16P的快速消耗_{manbet手机版2}manbet手机版在小鼠脑缺血期间。manbet手机版我们一直对这种化合物在大脑功能中可能扮演的角色特别感兴趣。manbet手机版我们用甘油-1,3- p纯化了一种使用G1P的酶_{manbet手机版2}manbet手机版作为磷酸供体，而不是ATP或FDP^{manbet手机版22、23}manbet手机版．manbet手机版Mg是一种必需的辅助因子，但Zn具有同样的活性，而且吸附得更紧密。manbet手机版抗EDTA的新鲜大脑提取物中65%的活性可能是锌形式的酶。manbet手机版合成酶被大脑中柠檬酸和FDP的浓度强烈抑制，这表明G16P具有调节作用_{manbet手机版2}manbet手机版而且它的合成速度在大脑的不同区域可能是不同的，正如它的分布是局部的一样^{manbet手机版24}manbet手机版．

manbet手机版泽尔达发现了一种大脑特异性G16P_{manbet手机版2}manbet手机版对肌苷-5- p有绝对需求的磷酸酶^{manbet手机版25}manbet手机版．manbet手机版由于IMP是缺血大脑中ATP分解的主要产物，这强烈地表明磷酸酶的激活是g -1,6- p迅速下降的原因_{manbet手机版2}manbet手机版在缺血。

manbet手机版线粒体己糖激酶。manbet手机版一个值得进一步研究的问题来自于我们在1967年的观察:肿瘤和动物细胞的己糖激酶大部分不在细胞质中，而在线粒体部分的外膜上^{manbet手机版26}manbet手机版．manbet手机版近年来有报道称，线粒体己糖激酶及其相关蛋白的释放可能在细胞凋亡级联的发生中发挥作用^{manbet手机版27}manbet手机版．

manbet手机版合成酶的机理。manbet手机版当我觉得我们了解了红细胞糖酵解系统的控制后，我的注意力又回到了机制问题上:ATP驱动的合成酶，反应如谷氨酰胺合成酶(谷氨酸+ NH)_{manbet手机版3.}manbet手机版+ ATP ->谷氨酰胺+ ADP + Pi)可以写成三个步骤:ATP + E -> ADP + E~P, E~P +谷氨酸-> E.谷氨酰胺~P, E.谷氨酰胺~P + NH_{manbet手机版3.}manbet手机版- > -谷氨酰胺+ Pi^{manbet手机版28}manbet手机版．manbet手机版然而，除非所有的反应组分都存在，否则无法发现ADP/ATP同位素交换。manbet手机版另一方面，迈斯特做了一个脉冲/追逐实验，似乎表明激活中间体的形成。manbet手机版酶，与ATP脉冲^{manbet手机版14}manbet手机版c -谷氨酸，被未标记的谷氨酸和羟胺追赶。^{manbet手机版14}manbet手机版在追捕中发现了c -谷氨酰-羟氨酸酯。manbet手机版然而，有人可能会说，一种非共价的e . atp .谷氨酸复合物可能不会比NH发生化学反应时更快地失去标记的谷氨酸_{manbet手机版2}manbet手机版OH进入了这个综合体。manbet手机版雅各布·巴塔纳(Jacob bar Tana)也有类似的假设。1972年，我在耶路撒冷的哈大沙医学院(Hadassah Medical School)休长假时遇到了他。manbet手机版他在用ATP预培养磷酸果糖激酶检测E~P机制时遇到了不可重复的问题^{manbet手机版32}manbet手机版然后用F-6-P和未标记ATP的混合物来追赶它。manbet手机版我认为他捕获的可能是e.p atp而不是E~P.ADP。manbet手机版我们同意在酒吧塔娜下一次访问美国时检验二元络合物的解离一定比化学反应快的假设。我们用酵母己糖激酶^{manbet手机版14}manbet手机版c -葡萄糖(脉冲)随后是ATP加上大量的未标记葡萄糖(追逐)。manbet手机版标记的G6P确实在追踪脉冲中被葡萄糖占据的全部酶的Michaeli与ATP的比例中被发现^{manbet手机版29}manbet手机版．manbet手机版葡萄糖的解离确实比它的磷酸化要慢，这与一般认为化学反应很慢的看法相反。manbet手机版由此证明了第一个可以确定二元配合物的功能，它们的解离速率和葡萄糖从三元配合物的解离程度的脉冲/追逐实验。

manbet手机版脉冲/追逐变体。manbet手机版随后，本实验室采用脉冲追踪法对己糖激酶在稳态下进行了研究^{manbet手机版14}manbet手机版C-G6P是在酸性淬火中形成的，而在高基体中形成的C-G6P随淬火时间的变化而变化，这一过程给出了中心平衡的位置~1和所有相互转换的速率常数^{manbet手机版30.}manbet手机版．manbet手机版我们做了脉冲/追逐实验，其中标记的葡萄糖来自于结晶状态下的己糖激酶单独或与ADP一起^{manbet手机版31}manbet手机版．manbet手机版尽管晶体溶解缓慢，但结果表明，它们当时的形态反映了晶体中的形态。manbet手机版仅含葡萄糖的晶体需要的ATP量与葡萄糖在溶液中的捕获量相同。manbet手机版另一方面，经洗涤除去ADP的E.glucose.ADP生长晶体所需的ATP要少得多。manbet手机版我们还用标准脉冲/追踪法发现，有4个氚原子，具有脉冲中水的比活性，在联合酸水合酶上有位置，可能是活性位点上的精氨酸-苏氨酸对，在顺式联合酸转化为柠檬酸的过程中被捕获^{manbet手机版32}manbet手机版．

manbet手机版位置同位素交换(PIX)。manbet手机版虽然传统的ATP/ADP交换作为E~PO的测试_{manbet手机版3.}manbet手机版或E-glutamyl ~阿宝_{manbet手机版3.}manbet手机版如果ADP没有离开谷氨酰胺合成酶，谷氨酰胺合成酶反应的中间产物就会失败，可能会观察到一种不同的同位素交换，在这种交换中，重新分离的ATP中的- -桥氧和- -非桥氧相互混合。manbet手机版这只需要结合的ADP中间体中的磷基氧能够进行位置同位素交换，依赖于返回ATP之前的对称扭转运动。manbet手机版博士后弗雷德·米德尔福特(Fred Midelfort)在一个巧妙设计的实验中观察到了这种新的交换过程^{manbet手机版33}manbet手机版．manbet手机版谷氨酸存在时的PIX速率与酶的反速率一致。manbet手机版汇率下降了NH_{manbet手机版4}^{manbet手机版+}manbet手机版与E.glut~P的浓度下降相一致。manbet手机版ADP复杂。

manbet手机版回收利用。manbet手机版最近，我们开始对产物形成后酶如何恢复感兴趣。manbet手机版当底物转化为产物时，酶活性位点的变化必须在反应再次发生之前被逆转。manbet手机版除极少数情况外，活性位点的回收发生在产物离开酶之前，因此被视为产物分离步骤的一部分。manbet手机版回收步骤是有序的还是随机的?manbet手机版这个序列是否复制了反应过程中的步骤顺序?manbet手机版富马酶有几个特性，这标志着它是一个罕见的例子，当盐存在以加速产物的释放，进一步的步骤序列仍然是整个反应周期的速率限制。manbet手机版通过产物类似物的非竞争性抑制的发生，不同的酶异构体变得可识别^{manbet手机版34、35}manbet手机版．manbet手机版当添加未标记的底物时，添加的标记反应产物反弹到底物上，表明酶的产物形式回收较慢，即布里顿逆流效应^{manbet手机版36、37}manbet手机版．manbet手机版D_{manbet手机版2}manbet手机版O和甘油表现出非竞争性抑制模式，表明它们的作用发生在不可逆步骤，产物释放之后。manbet手机版非竞争性抑制在只需要一个底物的催化反应的酶中很少见到。manbet手机版当它被看到时，这是回收缓慢的迹象。

manbet手机版富马酶反应的化学相互转化是一种碳离子机制，是反应周期中最快的部分。manbet手机版因此在平衡时,^{manbet手机版18}manbet手机版o水与苹果酸的转化比富马酸更快。manbet手机版也许反应化学的细节可以从回收的细节中确定。manbet手机版这种情况似乎是由抑制模式所表明的。manbet手机版碳离子中间类似物，2-羟基，3-硝基丙酸盐与苹果酸盐和富马酸盐都具有竞争关系，因此代表了循环中的中间物种，而所有其他抑制剂只与一种或另一种底物具有竞争关系，因此代表了产物物种。

manbet手机版当位于活性位点和溶剂之间的基本氨基酸残基突变为中性形式时，盐增加产物释放速率的能力就丧失了^{manbet手机版38}manbet手机版．manbet手机版突变酶的速率现在受到产物分离步骤的限制，而不是回收。manbet手机版我们推测，带负电荷的产物通过一个带正电荷的通道释放，而盐使这个通道更快。

manbet手机版Enol-pyruvate。manbet手机版对烯醇化丙酮酸氢的重原子核磁共振光谱导致了Mildred Cohn的反应立体化学的烯醇化酶使用(3R)-磷酸甘油酸-3-d^{manbet手机版39}manbet手机版．manbet手机版这使我们使用特别标记的3D, T-PEP解决了许多酶的立体化学反应^{manbet手机版40}manbet手机版．

manbet手机版我们长期以来认为烯醇式丙酮酸是丙酮酸激酶反应的中间产物，这一观点通过对稳定状态下丙酮酸激酶的直接化学分析得到了证实^{manbet手机版41}manbet手机版．manbet手机版我们还可以证明，通过磷酸酶处理PEP合成的烯醇式丙酮酸被丙酮酸激酶以适当的速率使用，尽管其亲和力低于预期的中间体^{manbet手机版42}manbet手机版．

manbet手机版其他问题。manbet手机版在一个令人惊讶的结果中，发现二羟基丙酮- p和FDP的席夫斯碱与肌肉醛缩酶蛋白在冷酸中沉淀^{manbet手机版43}manbet手机版．manbet手机版由于席夫斯碱中间体在酸中的稳定性和肠酰胺- ps的酸不稳定性，这一性质被用来确定它们作为醛缩酶反应中间体的浓度^{manbet手机版44}manbet手机版．manbet手机版指出了加合物的环状形成。manbet手机版因此，5-脱氧FDP形成的酸沉淀比FDP更不稳定。

manbet手机版柠檬酸盐和异柠檬酸盐通过联合水合酶的相互转化被证明发生在完全保留转移到C_{manbet手机版2}manbet手机版和C_{manbet手机版3.}manbet手机版但C之间的OH-没有保留_{manbet手机版3.}manbet手机版和C_{manbet手机版2}manbet手机版．manbet手机版结合的顺-附子中间产物必须翻转，可能绕着一个CH_{manbet手机版2}manbet手机版围绕活性位点的亚铁旋转，使酶结合的质子可以从中间体的相反面靠近，产生任何一种产物^{manbet手机版45}manbet手机版．

manbet手机版附子异构酶通过1,3烯丙基重排利用两种底物的(pro-S)氢催化顺式和反式附子的相互转化。manbet手机版立体化学和氚转移符合单碱基碳离子机制^{manbet手机版46}manbet手机版．

manbet手机版通过H-与d标记分子的不同反应速率的物理分离，证实G6P异构酶中氢的转移是在分子内进行的^{manbet手机版9}manbet手机版以及产地来源证的扣押地点_{manbet手机版2}manbet手机版对核酮糖1 5 5便士,_{manbet手机版2}manbet手机版在RUDP羧化酶反应中产生两分子磷酸甘油酸必须是C-2而不是C-4^{manbet手机版47}manbet手机版．

manbet手机版泽尔达和欧文·罗斯，1957年。

manbet手机版在这一章中，除了下一章“福克斯大通的泛素”中总结的泛素相关研究外，我已经提到了我和我的同事们在1997年退休之前一直在研究的大多数问题。manbet手机版退休后，泽尔达和我搬到了南加州的拉古纳森林，在那里我可以继续实验室工作，使用拉尔夫·布拉德肖在附近的加州大学欧文分校共享的空间和设施。

manbet手机版在此期间，我和化学系的詹姆斯·诺维克博士研究了甲基乙二醛合成酶(二羟基丙酮- p ->甲基乙二醛)的机理，试图理解我们的观察结果^{manbet手机版48}manbet手机版产物的甲基是非立体定向形成的。manbet手机版我们可以用光谱证明，甲基乙二醛的烯醇醛确实是酶的产物^{manbet手机版49}manbet手机版．manbet手机版酮化发生在酶之外，因此是非立体特异性的。manbet手机版酮化生成甲基乙二醛的过程非常缓慢，但在硫醇的辅助下，巯基半缩醛的形成中断了双键结合。manbet手机版也许正是由于这个原因，这个序列的下一个酶，乙二醛酶I，含有以谷胱甘肽为底物的甲基乙二醛加合物，d -乳基-谷胱甘肽为其产物。

manbet手机版我们观察到，没有谷胱甘肽的生物将不得不进化出另一种机制来处理甲基乙二醛，因为甲基乙二醛在交联大分子中的作用对细胞是有毒的。manbet手机版我们最近的研究表明，具有真菌硫醇(n -乙酰半胱氨酸-葡萄糖胺-肌醇)作为主要还原性化合物的分枝杆菌确实进化出了一种酶，与产生乳糖-真菌硫醇的“乙二醛酶”执行相同的序列(未发表)。manbet手机版因此，这是酶使用前一步的非酶产物作为底物的第二个例子。

manbet手机版回顾我50年兼收兼收的研究之旅，我很感激它的进展，尽管还不够聪明，无法打开酶结构的黑箱。manbet手机版我采取的方法是成功的，至少，吸引了优秀的博士后，他们中的一些人在1975-1980年与Avram Hershko一起从事泛素/蛋白质分解工作。

manbet手机版我特别感谢那些帮助我找到解决在生物化学早期困扰我们的许多问题的方法的人。manbet手机版其中有塔纳、史蒂夫·本科维奇、j·f·贝尔曼、米尔德里德·科恩、亚伦·切哈诺沃、唐·克莱顿、拉吉·古普塔、阿瑟·哈斯、肯尼斯·汉森、阿夫拉姆·赫什科、安东尼·贾沃洛斯基、g·卡克利、罗伯特·肯普、朱迪斯·p·克林曼、大卫·科索、唐纳德·郭奥、古斯塔夫·林哈德、奥利弗·洛瑞、奥尔顿·梅斯特、c·弗雷德·米德尔福特、盖德·马尔霍弗、村上科科、詹姆斯·诺维克、爱德华·奥康奈尔、弗兰克·奥斯基、林多·帕特森、塞西尔·皮克art、西德尼·里德、约翰·理查德、詹姆斯·罗宾逊、泽尔达·罗斯、基思·施雷、manbet手机版Steve Seeholzer, Frank Solomon, Michael Summers, Jessie Warms, Mary Wimmer, Keith Wilkinson, James Willard, Harland Wood和Alvin Zipursky。

manbet手机版这本自传/传记是在获奖时写的，后来以丛书的形式出版manbet手机版Les大奖赛诺贝尔/manbet手机版诺贝尔演讲manbet手机版/manbet手机版狗万世界杯诺贝尔奖manbet手机版．manbet手机版这些信息有时会随获奖者提交的附录而更新。

manbet手机版Irwin Rose于2015年6月2日去世。