manbet手机版我manbet手机版1957年11月23日，威廉·乔治和南希·普里西拉·凯林出生于纽约市的牙买加。manbet手机版我母亲的第一次怀孕以流产告终。manbet手机版为我接生的产科医生是我母亲家的一位朋友。manbet手机版他起初以为我是死胎，并哀叹这种产科问题似乎不成比例地影响了他的朋友。manbet手机版他显然给了我最后一击，不管是为了他还是为了我。manbet手机版不管怎样，我开始哭了起来。manbet手机版最后，我母亲又生了四个孩子，每个孩子的年龄间隔都是两岁。

manbet手机版在成为曼哈顿的一名国际税务和房地产律师之前，我父亲曾在杜克大学(Duke University)上过大学和法学院。manbet手机版在成为大都会人寿保险公司的精算师之前，我母亲在阿德尔菲学院主修数学。manbet手机版我出生后，她成了一名家庭主妇。

manbet手机版我们一直住在纽约的牙买加，直到我两岁，那时我们搬到了罗克维尔中心——纽约长岛的一个中产阶级郊区。manbet手机版在那里，我被一所公立小学录取。manbet手机版我回忆起对小儿麻痹症的恐惧，并记得口服小儿麻痹症疫苗。manbet手机版这也许是我第一次见识到现代医学所能创造的奇迹。

manbet手机版一年级的第二天，一些男同学来到我家的小后院玩。manbet手机版有一次，当我们在打闹时，我被其他男孩压在地上。manbet手机版其中有一个男孩，我后来才知道，他在一年级时曾两次因为行为问题被留级。manbet手机版他比我们其他人都高大强壮。manbet手机版他扭着我的腿，就像它是玩具飞机上的螺旋桨一样(也许是为了模仿《活宝三人组》(Three Stooges)的滑稽动作)。manbet手机版我痛苦地尖叫着，直到男孩们最终散去。manbet手机版我爬在地上，走不动了，直到我走到后门，找到了我妈妈。manbet手机版她不敢相信我的腿会骨折，所以她让我站起来。manbet手机版我立刻倒在地上。manbet手机版她开车送我去看儿科医生，医生确认我的腿断了，并在我大腿中部打了石膏。 I remember looking at my XRAY on our way home (even I could tell my leg was broken).

manbet手机版接下来的8个星期，我呆在家里，基本上不能动，尽管我可以在房子里四处走动，如果我屁股着地的话。manbet手机版一位家庭教师每天都到我家来，这样我就不会在功课上落后了。manbet手机版当我回到学校的时候，我已经遥遥领先了，我想我可能会遇到麻烦。manbet手机版我记得我坐在书桌前，偷偷地擦掉同学们第一次布置的作业，然后重新做一遍。manbet手机版我有时会想，我在家上学时受到的所有个人关注是否对我后来的智力发展和学业成就有所帮助。manbet手机版与此同时，我也想知道这是否导致了我的归属感不强。manbet手机版第二年，我转学去了一所天主教小学(圣阿格尼斯)，这种情况进一步加剧。manbet手机版在那里，我发现自己再次沉浸在已经彼此认识的学生中。

manbet手机版在圣阿格尼斯，我是由修女和修女教的。manbet手机版可悲的是，在那个时代，大多数聪明的女性被告知她们的职业选择是:护士、教师或修女。manbet手机版我敢肯定，我在小学(后来是高中)的一些女老师今天会成为律师、医生、大学教授或首席执行官。manbet手机版我在学校表现非常好，直到五年级，两件事发生了。manbet手机版首先，班上最酷的孩子和我成了朋友。manbet手机版通过联想，我突然变得很酷。manbet手机版其次，教我的是一位年轻迷人的修女，而不是一位六十多岁的俗人(至少我觉得他们是这么老的)。manbet手机版这两件事都导致了我的很多行为，包括行为不端和不做作业。manbet手机版标准的惩罚措施包括放学后留校察看，并在1×1到12×12上抄写乘法表。manbet手机版罪行越严重，你需要写的副本就越多。 I remember once sitting in my backyard writing out 40 copies of the multiplication table. The silver lining was that I was already good in math and now knew multiplication (and hence division) cold.

manbet手机版在那些日子里，尽管我很滑稽，但我的各科成绩都在90分或80分左右(满分100分)。manbet手机版有一天，我五年级的老师打电话给我的父母，告诉他们我应该做什么manbet手机版多manbet手机版以我的天赋，我在学校表现得更好。manbet手机版在那之后，我的学习习惯有所改善，但并不是典型的。

manbet手机版我父亲喜欢钓鱼，我们花了很多时间一起钓鱼。manbet手机版我认为钓鱼和科学之间有很多相似之处。manbet手机版钓鱼成功的两个关键是技术专长(例如，如何在鱼钩上放饵)和直觉(例如，知道在哪里钓鱼)。manbet手机版两者都比从书本上学习容易。manbet手机版类似的考虑也适用于科学。manbet手机版但技术专长和直觉只能帮你到此为止;manbet手机版你还需要运气。manbet手机版在任何一天，最大的鱼都可能被新手而不是专家捕获。manbet手机版科学发现也是如此。

manbet手机版在20世纪60年代，由于冷战和太空竞赛，科学在美国备受推崇。manbet手机版像许多小男孩一样，我有一个玩具显微镜，化学试剂(里面的化学物质实际上是危险的)，电动汽车和火车，一套竖立器，以及其他激发科学兴趣的玩具。manbet手机版我从父亲在华尔街的办公室里向得意洋洋的阿波罗号宇航员扔纸带和五彩纸屑。manbet手机版我也有充足的自由时间去玩，无论是去海滩，扔球，收集邮票，经营一个柠檬水摊，还是和邻居的孩子们一起玩游戏。manbet手机版然而，我后悔花那么多时间看电视而不是读书。

manbet手机版到20世纪60年代末，我父亲买得起大得多的房子了。manbet手机版他想住在离纽约通勤距离近的镇上，那里有强大的公立学校，而不是支付五所私立学校的学费。manbet手机版1970年夏天，我们搬到了康涅狄格州的费尔菲尔德，同年9月，我开始上八年级。manbet手机版进入青春期总是充满挑战。manbet手机版在这种情况下，由于进入了新的学校系统，情况变得更加复杂。manbet手机版这加剧了我的害羞。manbet手机版我们现在有了一栋带游泳池的漂亮房子，但只有少数几个孩子住在步行或骑自行车可以到达的地方。manbet手机版幸运的是，当附近的池塘在冬天结冰时，我有几个邻居朋友可以和我一起玩触身式足球或冰球。

manbet手机版另一个问题是，我们学校的许多科目都是分班授课，而分班一是为最有天赋的学生保留的。manbet手机版作为一名新人，我被安排到了第二阶段。manbet手机版这种缺乏刺激可能导致了我糟糕的学习习惯，直到高中三年级。manbet手机版我通常会坐在教室的后面，默默地嘲笑坐在前面的孩子，一有机会就卑躬屈膝地举手。manbet手机版我只做了最少的家庭作业，也没有复习当天课堂上讲的内容。manbet手机版我的一个可取之处是，我数学学得很好，不用真正努力，而且在数学能力测试中一直很好。manbet手机版结果，我的成绩单上的数学成绩通常是“a”，其他科目的成绩通常是“a”和“B”。manbet手机版在这段时间里，我更加清楚地意识到我喜欢定量/客观的科目，不喜欢定性/主观的科目。manbet手机版我喜欢学习概念和思想，讨厌死记硬背。manbet手机版我对科学很感兴趣，但我觉得生物学很无聊，因为它主要是描述性的。 Chemistry and physics were more my speed. During this time, I learned that I tended to like the things that I was good at and tended to be good at the things that I liked.

manbet手机版在我大三的时候，我的高中同学罗杰·勒德洛得到了一台连接到费尔菲尔德大学主机的计算机终端。manbet手机版虽然我的数学很好，但我并没有看到数学是我的职业。manbet手机版计算机似乎是一种让数学发挥作用的令人兴奋的方式。manbet手机版我喜欢在计算机科学中，就像在数学中一样，有客观的方法来知道你的解决方案是否正确或“有效”。manbet手机版我开始学习各种编程语言，有时放学后会骑自行车去费尔菲尔德大学(Fairfield University)，听取那里教师的意见。

manbet手机版大三时的一天，我坐在罗杰·勒德洛(Roger Ludlowe)的电脑终端前，看到垃圾箱里有一本孤零零的小册子。manbet手机版它描述了在佛罗里达大西洋大学为32名“天才”高中生举办的为期八周的国家科学基金会学生数学和计算机科学培训计划。manbet手机版我申请并被录取了。

manbet手机版在我飞往佛罗里达的航班上，我遇到了另一个男孩，他正在去同一个项目的路上。manbet手机版他有很多书只是为了消遣而读，包括数学书和具有挑战性的小说，比如《万有引力的彩虹》。manbet手机版和那年夏天所有的高中生一样，他是我所见过的最聪明的学生之一。manbet手机版然而，我惊喜地发现，在那年夏天我们修的大学课程中，我可以和他们保持一致。manbet手机版我发现，在学校里，当材料有趣且具有挑战性时，当我周围都是非常聪明的人时，我的表现会更好。manbet手机版在我的学术生涯中，我第一次去图书馆借额外的书来补充我指定的阅读，并且会工作到深夜解决数学问题或编写代码。

manbet手机版我和我的暑期同学们参加了一个俄罗斯奥林匹克数学测试(或类似的测试)。manbet手机版它包含了一种高级的、抽象的数学问题，如果你有数学天赋，这些问题不需要事先接受正式的指导就能解决。manbet手机版这是我见过的最具挑战性的考试。manbet手机版当我得到45分，这是我得到过的最高分时，我起初很沮丧。manbet手机版然后我环顾四周，发现许多其他学生的成绩比我差得多。manbet手机版我的自尊心很快恢复了，直到我看到另一个学生只得了145分。manbet手机版我不应该感到惊讶。manbet手机版他是唯一一个比我更擅长编程的学生。manbet手机版例如，当我写一个玩扑克的计算机程序作为我的期末项目之一时，他写了一个玩桥牌的程序。manbet手机版我认为他是那种会成为学术数学家的天才，而我最好找到一些更实际的东西。 I didn’t see the personal computer revolution coming and didn’t want to write computer code for industrial or military applications. I thought a career in medicine could be the answer (ironically, “Mr. 145” also became a medical doctor).

manbet手机版虽然我很高兴得知我不是那个夏天32个学生中最笨的，但由于我之前糟糕的学习习惯，我的高中成绩肯定是最差的。manbet手机版我决定在大四的时候做个实验。manbet手机版我会坐在教室前面积极参与，和班上聪明的孩子交朋友(而不是贬低他们)，按时完成所有的家庭作业(和额外的学分问题)，每天复习我们上过的课。manbet手机版我成功地申请到所有的“1”课程，并将微积分预科和进阶微积分并行而不是串联学习。manbet手机版我在卧室里放了一块公告牌，上面写着我希望得到的“a”。manbet手机版我决定，如果我在学校表现好，我只会在周末玩得开心。

manbet手机版我的计划成功了。manbet手机版我的成绩都是A。manbet手机版我在学术能力测试(SAT)和大学所需的成就测试中也取得了很好的成绩。manbet手机版我是个“大器晚成”的人。

manbet手机版我的父亲是一名工人的儿子，是家里第一个上大学的人。manbet手机版考虑到父母经济拮据，他选择了一所还能负担得起的有前途的学校。manbet手机版他申请了杜克大学，这所大学似乎符合他的要求，但被拒绝了。manbet手机版然后，他从长岛的家搭便车到北卡罗来纳州的达勒姆(在20世纪50年代，这花了他好几天的时间)为自己的案子辩护。manbet手机版招生人员出于钦佩或怜悯，对他进行了面试，并对他进行了能力测试。manbet手机版他的表演使他被录取了。manbet手机版在杜克大学读书的时候，我父亲打过很多零工来支付学费，包括在宿舍里非法卖三明治。manbet手机版他获得了杜克大学法学院(Duke Law School)的奖学金，并获准将大学四年级和法学院第一年的学习结合起来，以支付学费。manbet手机版我父亲对杜克大学非常忠诚，他梦想我，他的长子，也能上杜克大学。

manbet手机版我申请了杜克大学，飞到达勒姆参加面试。manbet手机版我父亲很高兴，因为当我离开面试时，他的杜克大学同学、招生副主任向他眨了眨眼，让他知道我很可能被录取。

manbet手机版我还申请了哈佛大学(Harvard)和麻省理工学院(MIT)(在那个年代，“大器晚成的人”仍然可以进入名校)。manbet手机版可悲的是，这在今天看来似乎不是真的)。manbet手机版我和“145先生”以及他的一个同学一起参观了哈佛。manbet手机版我们在一个小宿舍里过夜。manbet手机版那天晚上，学校的12名学生让我们站在他们的公共区域中央，告诉他们我们的名字、家乡和SAT分数。manbet手机版当“145先生”和他的朋友完成后，他们都被告知“你们可以进去”。manbet手机版当我给出我的SAT成绩时，他们说“你可能想申请布朗大学”。manbet手机版公平地说，我的语言成绩没有我的数学成绩那么好，它们是正确的，因为我被列入了候补名单。

manbet手机版然而，当我被麻省理工学院录取时，我感到无比自豪。manbet手机版我走进父亲的书房，告诉他我倾向于麻省理工学院。manbet手机版他放下威士忌问道:“要想进入麻省理工学院，你的数学不是很好吗?”manbet手机版，我当然答应了。manbet手机版然后他说:“我要给你出一道数学题，如果你去麻省理工学院，你会付学费，但如果你去杜克大学，我会付你的学费。”manbet手机版我很快算了一下。manbet手机版然而，说实话，我确实反复考虑杜克大学是否可能是未来医生的更好选择。manbet手机版我想我在杜克大学可能会比在麻省理工学院更受关注(我以为麻省理工学院有一大堆“145”)。

manbet手机版我在杜克大学的大一班级里，有很多学生显然多年来都表现得很好。manbet手机版我觉得我才刚刚开始，我很想知道如果我真正努力的话，我能得到什么样的成绩(我很尴尬，因为那时对我来说，成绩仍然是主要的因素)。

manbet手机版我主修数学和化学，部分是为了满足医学预科的要求。manbet手机版杜克大学有很多医学预科的学生，人们普遍认为，要想进入医学院，你需要在有机化学上得“A”。manbet手机版我在大一的无机化学课上表现出色，因为它具有逻辑性、概念性和定量性(再加上我有一位出色的高中化学老师，拉尔夫·米诺波利先生)。manbet手机版有机化学需要更多的死记硬背。manbet手机版我的第一次有机化学考试，我得到了一个“C”，尽管我很努力学习。manbet手机版接下来的两次考试我得了“B”，然后得了“a -”。manbet手机版奇迹般地，我在期末考试中得了“A+”，因此这学期得了“A”。manbet手机版我躲过了一劫。manbet手机版我向自己保证下学期不会再让自己陷入这样的困境，但同样的考试成绩模式却一再出现。manbet手机版我的假设是，死记硬背的人到期末考试时都记不住第一次考试的内容，而也许我毕竟吸收了一些概念。 However, I haven’t excluded divine intervention.

manbet手机版我在杜克大学的平均成绩比高中时要高。manbet手机版具有讽刺意味的是，我的几个“b”之一是人类生理学，这只是重申了我避免(主要是描述性的)生物学课程的倾向。manbet手机版我是杜克大学数学系最好的学生之一，但我担心自己只是小池塘里的大鱼。manbet手机版因此，我继续思考医学。manbet手机版一位朋友建议我做一个实验室研究项目来美化我的医学院申请。

manbet手机版大三时，我与杜克大学的一位物理化学家会面，讨论了一个研究项目，该项目涉及使用电子顺磁共振(EPR)研究细胞色素C的折叠。manbet手机版我可以从第二年夏天开始，一直持续到秋季学期。manbet手机版他告诉我，之前参与这个项目的七名本科生都上了医学院。manbet手机版离开他的办公室时，我以为自己找到了进入医学院的黄金入场券。

manbet手机版现在回想起来，我意识到我应该问问为什么我的七位前任都不能完成这个项目。manbet手机版我很快就发现了原因。manbet手机版他们给了我一张长凳和我前辈的笔记本，但我的导师没有给我任何真正的指导。manbet手机版事实上，我和他几乎没有互动。manbet手机版他实验室里的其他科学家都没有做过与我的项目有丝毫关系的事情。manbet手机版他们中的许多人只从事干式实验，没有一个是蛋白质生化学家。manbet手机版我应该将一个自旋标签共价偶联到细胞色素C上，将修饰的细胞色素C从未修饰的细胞色素C中分离出来，然后用EPR研究标记的细胞色素对化学变性剂的反应。manbet手机版我迷路了。manbet手机版我以为有些人凭直觉知道在实验室里该做什么，而其他人，包括我，都不知道。manbet手机版这段经历让我确信，我可以吸收旧知识，但缺乏创造新知识的能力(至少在实验室里是这样)。

manbet手机版那年秋天，我参加了一位来访的细胞色素C专家的讲座。manbet手机版他很友好地简要讨论了我的项目。manbet手机版他的第一个问题只是问我“为什么?”manbet手机版——具体地说，“你为什么要这么做?”manbet手机版他接着告诉我，建议的共价添加自旋标签的条件已经会使我的蛋白质变性，而我导师推荐的纯化方法是将变性蛋白质从天然蛋白质中分离出来，而不是将标记的天然蛋白质从未标记的天然蛋白质中分离出来。

manbet手机版我向我的教授提出了我对项目的各种担忧。manbet手机版在我大四的圣诞假期，我收到了一封专递信，上面写着我的独立学习项目他给了我一个“C -”。manbet手机版他还在页边空白处写道:“凯林先生似乎是一个聪明的年轻人，他的未来在实验室之外。”

manbet手机版尽管这次惨败，我还是被几所医学院录取了，包括杜克大学(我又被哈佛大学拒绝了)。manbet手机版当时医学院的基础科学课程包括大量的记忆，让人麻木。manbet手机版有一件事救了我，那就是杜克大学把基础科学的标准两年压缩到了一年。manbet手机版第一年对我来说很艰难，但我觉得我可以承受一年的任何事情(尽管我确实想知道我是否犯了一个错误，没有追求数学和计算机科学)。manbet手机版另一个可取之处是，这些课程都是优等生/及格/不及格，几乎没有人获得优等生是可以理解的。manbet手机版你只是勉强通过了。

manbet手机版在第二年，我参加了妇产科、内科、精神病学、外科和儿科的经典临床轮转。manbet手机版我喜欢我的每一次轮岗，现在可以看到第一年学到的知识在行动。manbet手机版这是令人振奋的，并重申了我去医学院的决定。manbet手机版我的内科总住院医师是保罗·克洛特曼医生。manbet手机版我觉得他是我见过的最聪明、最有趣、最酷的人。manbet手机版我当时就决定有一天我要成为一名总住院医师。

manbet手机版杜克大学医学院的学生被鼓励在第三年全职在实验室工作。manbet手机版带着些许恐惧，我再次尝试了实验室研究。manbet手机版我和兰迪·吉尔特医生一起研究肿瘤血流。manbet手机版与我的第一位导师不同，兰迪非常乐于助人，也很鼓励我。manbet手机版在此期间，我读了关于肿瘤血管生成和与von Hippel-Lindau (VHL)病相关的高度血管性肿瘤的文章。

manbet手机版在我大三的时候。manbet手机版迈克尔主教manbet手机版来杜克大学医学院做讲座，非常令人兴奋。manbet手机版在书中，他描述了第一个致癌基因，其中一些编码激酶。manbet手机版我确信我看到了肿瘤学的未来，并认为这将导致新的治疗方法(例如，激酶抑制剂)。manbet手机版可悲的是，在接下来的几年里，反对者会告诉我为什么这是天真的。manbet手机版只有像亚历克斯·莱维茨基和亚历克斯·马特这样的人才能证明他们错了。

manbet手机版虽然我的第二次实验室经历比第一次好得多，但这并不足以让我相信我在实验室有一个未来。manbet手机版我在约翰霍普金斯大学的内科实习和住院医师。manbet手机版我喜欢内科，部分原因是我喜欢解决复杂的临床难题。

manbet手机版我实习时的主席是维克多·麦库西克医生。manbet手机版他教会了我医学历史的重要性和人类遗传学的力量。manbet手机版我做住院医生时的主席是杰克·斯托博医生。manbet手机版他每周进行一次“从实验室到病床”的粉笔讲座，向我介绍了新兴的分子技术，比如DNA限制和Southern印迹法。manbet手机版很明显，一场革命即将发生，即使我不认为自己会参与其中。

manbet手机版一位同事把我介绍给埃里克·费伦，他当时是伯特·福格斯坦博士的医学院学生。manbet手机版埃里克已经发表了几篇具有里程碑意义的论文，在这些论文中，他应用现代分子技术获得了对癌症遗传学的新见解。manbet手机版他鼓励我参加伯特的一个研讨会。manbet手机版当时，人们认为，与血液系统恶性肿瘤相比，实体瘤的异质性和复杂性太大，无法用现代分子技术进行研究。manbet手机版伯特的结肠癌研究打破了这种观点。manbet手机版这是继迈克尔·毕晓普之后的第二次讲座，我知道我看到了未来。

manbet手机版我热爱临床医学，很荣幸被选为约翰霍普金斯大学的四名助理服务主任之一(相当于总住院医师)。manbet手机版那一年我学到了更多的临床医学知识，更重要的是，我遇到了一位美丽的四年级医学生(尽管她从不向我汇报!)manbet手机版卡罗琳·谢尔博后来成了我的妻子，也是我两个漂亮孩子凯瑟琳·格雷斯和特里普的母亲。

manbet手机版总住院医师通常喜欢了解罕见的同名综合征，如von Hippel-Lindau (VHL)病。manbet手机版这样，如果学员在查房时挑战他们的权威，他们就可以用学员从未听说过的疾病问题让他们闭嘴。manbet手机版出于同样的原因，总住院医师喜欢对各种体征和症状进行长时间的鉴别诊断。manbet手机版例如，我已经记住了红细胞增多症的所有病因。manbet手机版让我感到奇怪的是，VHL疾病的三个标志性肿瘤——肾癌、血管母细胞瘤和嗜铬细胞瘤——也在其中。manbet手机版这一点，再加上它们的血管性增加，我认为VHL基因与氧感应有关，因为血管生成和红细胞生成通常是由缺氧(低氧水平)诱导的。

manbet手机版我决定专攻医学肿瘤学，因为我喜欢多系统疾病，并且认为癌症生物学很迷人。manbet手机版我也意识到内科医生的祸根在于区分病人和不太严重的病人。manbet手机版这不是癌症患者的问题。

manbet手机版1987年，我搬到波士顿，在丹娜-法伯癌症研究所(Dana-Farber Cancer Institute)担任肿瘤内科研究员。manbet手机版我终于到了哈佛，这促使我怀疑哈佛(或者我!)是否犯了一个错误。manbet手机版我的七位同事给我留下了深刻的印象，他们中的大多数人都比我有更多的研究经验。manbet手机版我被认为是最有可能成为临床肿瘤学家而不是实验室研究员的人。

manbet手机版获得肿瘤医学委员会认证的一个途径是在实验室工作2年。manbet手机版我想看看顶级实验室里的生活是什么样子会很令人兴奋，即使我自己并不期望成功。manbet手机版我采访了麻省理工学院的罗伯特·温伯格博士，他刚刚克隆了视网膜母细胞瘤基因manbet手机版RB1manbet手机版。manbet手机版他显然乐于接受实验室里有一位医生兼科学家，他曾训练过进行克隆的史蒂文·弗兰德博士manbet手机版RB1manbet手机版。manbet手机版然后鲍勃拿出了一个账簿，并决定在三年内为我留有空间。manbet手机版我的心一沉，因为那一年我必须开始上课。

manbet手机版在研究鲍勃的实验室时，我遇到了谢利·伯恩斯坦博士。manbet手机版谢利，温伯格实习医师兼科学家，刚刚在DFCI建立了自己的实验室来研究转移。manbet手机版我加入了谢利的团队，但我现在意识到我有点随波随流。manbet手机版在我的空闲时间，我读一本manbet手机版科学manbet手机版这篇论文描述了从石蜡块中扩增K-Ras外显子的pcr。manbet手机版为了好玩，我试着重复这个实验。manbet手机版令我惊讶的是，它成功了!manbet手机版我记得当我打开紫外线盒，看到一条尺寸正确的乙二胺染色带时的兴奋。manbet手机版在加入Shelly大约4个月后，他告诉我他将关闭他的实验室回到临床实践。manbet手机版这似乎是另一个迹象，表明我不适合做科学!manbet手机版我是个孤儿。

manbet手机版我在临床肿瘤学的最后一位主治医生是大卫·利文斯顿医生。manbet手机版我知道他经营着一个实验室，我向他寻求建议。manbet手机版我给他看了我的PCR结果，也许这让他印象深刻。manbet手机版或者他看到了别的东西。manbet手机版无论如何，他邀请我加入他的实验室。manbet手机版原来他和鲍勃·温伯格一样，在研究manbet手机版RB1manbet手机版基因。manbet手机版David的研究小组和Ed Harlow的研究小组发现sv40t和腺病毒E1A蛋白分别与manbet手机版RB1manbet手机版基因产物pRBmanbet手机版我要绘制pRB的T/ e1a结合区，我所学的PCR技术被证明对快速制造pRB突变体很有用。manbet手机版最小的T/ e1a结合区，我们称之为pRB“口袋”，被证明是癌症相关的热点manbet手机版RB1manbet手机版突变。manbet手机版因此，我们假设pRB口袋可能与一种或多种细胞蛋白结合。manbet手机版我们最初寻找它们的策略是在细胞的抗prb免疫沉淀物中寻找共免疫沉淀蛋白。manbet手机版然而，问题是我们的主力抗prb抗体的供应是不可靠的。

manbet手机版大卫决定我们需要制造自己的抗prb抗体。manbet手机版我要在大肠杆菌中表达pRB片段然后注射到兔子体内。manbet手机版诀窍在于找到合适的原核表达载体，因为当时大肠杆菌中的蛋白质表达还很不稳定。

manbet手机版有一天，一位公司代表给我留下了一本小册子，介绍一种新的原核表达载体，它编码谷胱甘肽s -转移酶，与感兴趣的蛋白质融合在一起。manbet手机版这种GST融合物通常比未融合物更容易溶解，并且可以使用谷胱甘肽sepharose进行纯化。manbet手机版通常，捕获的蛋白质将在其预定用途之前用谷胱甘肽洗脱。manbet手机版然而，我意识到，我可以将GST融合到pRB口袋中，用谷胱甘肽sepharose捕获它，然后使用固定化的融合蛋白捕获pRB结合蛋白。manbet手机版我最终发现了一系列匿名35s标记的蛋白质，它们具有我一直在寻找的特性:它们与野生型(而不是突变型)pRB结合，并被T/ e1a衍生的肽取代。

manbet手机版当我的发现发表在manbet手机版细胞manbet手机版当我被允许在重要会议上展示它的时候。manbet手机版在1990年冷泉港研讨会(Cold Spring Harbor Symposium)上发表演讲后，我走到罗伯逊公寓(Robertson House)的泳池边，那里有一个孤独的人在享受下午的时光。manbet手机版他说我的演讲很精彩。manbet手机版我告诉他，我非常感谢他的赞扬，因为我刚刚得知，我申请的美国国立卫生研究院(NIH) K08内科科学家奖学金支持我的工作，得到了一个非常不利的分数。manbet手机版他愤愤不平地问我，是哪个研究小组评估了我的申请。manbet手机版当我告诉他时，他说:“这太离谱了，我是学习小组的主席。”manbet手机版此后不久，NIH通知我，我的基金终于得到了资助。

manbet手机版我仍然不知道我的pRB结合蛋白的身份，也不知道哪些直接与pRB结合。manbet手机版随后，我的同事迈尔斯·布朗向我介绍了迈克尔·布拉纳的工作，他使用放射性ATP、心肌激酶和基因编码的磷受体位点对重组蛋白进行了放射性标记。manbet手机版我重新设计了我的GST融合载体，使这个磷受体位点编码在GST和pRB片段之间。manbet手机版经过大量的故障排除，我终于生产出具有生物活性的放射性标记的GST-pRB，我用它在“远西印迹”检测中探测全细胞提取物。manbet手机版我知道这个系统是有效的，因为我可以在适当的细胞提取物中检测到E1A和T。manbet手机版我还看到了一个~50 kD的双子星，这促使我与山姆·斯佩克博士的博士后研究员埃里克·弗莱明顿合作。manbet手机版Erik帮我用放射性标记的GST-pRB筛选了一个lambda噬菌体表达库。manbet手机版David Livingston, Joe Nevins和Pradid Raychaudhuri曾报道过pRB可以(直接或间接)结合dna结合活性“E2F”。manbet手机版当我的表达克隆策略产生了第一个E2F cDNA(称为E2F1)时，我很高兴。

manbet手机版为什么我作为一名博士后会如此成功?manbet手机版与我第一次在实验室的经历形成鲜明对比的是，我得到了一个很棒的项目，在一个很棒的实验室里，和一个很棒的导师一起工作。manbet手机版我对自己的期望是如此之低，以至于当最平淡无奇的实验，比如限制DNA或转化细菌，真的奏效时，我都兴奋不已!manbet手机版重要的是，我还相对naïve，这可以在实验室的祝福。manbet手机版我雄心勃勃地尝试了许多实验，而一个更疲惫的科学家会认为风险太大而不予理睬。manbet手机版我不知道很多问题的通常解决方法。manbet手机版这迫使我足智多谋，重新审视问题。

manbet手机版1992年，我在大卫实验室的走廊里建立了自己的实验室。manbet手机版我最初做了一些E2F实验，但很明显，有很多优秀的实验室准备研究这种蛋白质。manbet手机版我不想回顾我的科学生涯，然后意识到我所做的一切，无论有没有我都可以完成。manbet手机版这很难成为我离开我热爱的临床医学的理由。manbet手机版此外，人们明智地建议我开始区分我的科学和大卫的科学。manbet手机版我短暂地试图表达克隆的意思manbet手机版自动取款机manbet手机版基因功能互补试验，但没有成功。manbet手机版然而，在1993年夏天，我读到了一篇文章manbet手机版科学manbet手机版论文描述了克隆的manbet手机版VHLmanbet手机版肿瘤抑制基因，并决定将其作为我的研究重点。manbet手机版我认为研究VHL基因会让我们了解肾癌的发病机制(肾癌是十大最常见的癌症之一)，血管生成的控制，以及潜在的氧气感知。manbet手机版我在书中对这项工作作了更详细的描述manbet手机版诺贝尔演讲manbet手机版。manbet手机版它得到了美国国立卫生研究院、霍华德·休斯医学研究所(我于1998年加入)、多丽丝·杜克慈善基金会、默里基金会和已故的威廉·谢尔顿博士的支持。

manbet手机版作为一名年轻的教员，我每年有一个月担任住院临床主治医生，每月还会在社区医院的重症监护室“兼职”几个晚上。manbet手机版然而，到20世纪90年代末，我不再为病人看病了。manbet手机版首先，我从不希望人们说我是一个优秀的科学家manbet手机版医生manbet手机版科学家。manbet手机版我告诉年轻的医生，如果他们的选择是成为“A”临床医生还是“B”科学家，他们应该选择前者。manbet手机版如果我想成为一名“一流”科学家，我知道我必须全职工作。manbet手机版其次，我很快意识到，大多数转到DFCI的癌症患者已经被诊断出来了。manbet手机版我解决的诊断难题通常与治疗的医源性并发症有关。manbet手机版病房里也有句俗话，普通的东西就是普通的东西。manbet手机版医学上有很多东西在你第一次或第二次看到时很有趣，但在你第20次看到时就没那么有趣了。manbet手机版在实验室里解谜开始给我带来以前给病人看病时的那种快乐。manbet手机版同样令人痛苦的是，我的大多数癌症患者所能得到的治疗方法都严重不足。manbet手机版我认为更有效的治疗方法需要对现代分子生物学提供的癌症发病机制有深入的了解。 Lastly, you can’t, by definition, devote yourself fully to two careers. When I was younger, I believed that my patients were lucky to have me as a doctor and I promised myself that I would stop seeing patients if I could no longer defend that view. I had too much respect for my full-time clinical colleagues and my patients to become a part-time clinician with waning skills.

manbet手机版2003年，在我获得诺贝尔奖的几年后，我的妻子卡罗琳，她自己也是一位受人爱戴的乳腺癌外科医生，得了乳腺癌。manbet手机版她最终接受了乳房切除术和化疗。manbet手机版尽管我曾经照顾过数百名癌症患者和他们的家人，但我现在对他们的痛苦和痛苦有了更深刻的理解。manbet手机版卡洛琳从乳腺癌中活了下来，却在2010年患上了一种无关的胶质母细胞瘤。manbet手机版她接受了两次大的脑部手术，每次都需要数月的康复才能再次行走，同时还接受了放射治疗和化疗。manbet手机版我们组建了一支由才华横溢的临床医生和科学家组成的“梦之队”来帮助我们。manbet手机版例如，她的肿瘤基因组在早期被测序，作为特定靶向药物的指导。manbet手机版然而，最终，我们在2015年失去了她。manbet手机版卡洛琳和我经常开玩笑说，如果我得了诺贝尔奖会是什么样子。狗万世界杯manbet手机版没有她在我身边领奖，我感到苦乐参半。

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