manbet手机版诺贝尔演讲，1951年12月11日

manbet手机版黄热病疫苗的研制

manbet手机版黄热病的研究可分为两个阶段。manbet手机版第一次发生在世纪之交，当时沃尔特·里德和他的同事利用人类志愿者证明，这种疾病的病原体是一种可过滤的病毒，它是由普通的城市蚊子叮咬传播的，后来被命名为蚊子manbet手机版埃及伊蚊manbet手机版．manbet手机版第二阶段开始于1928年，当时斯托克斯、鲍尔和哈德森发现普通的印度恒河猴易感染黄热病，从而提供了一种可用于实验室的动物。manbet手机版这些工作人员建立的第一种黄热病毒株被称为阿西比毒株，以分离出该毒株的患者命名。manbet手机版它已被广泛用于黄热病研究，稍后将说明，它是最终生产17D疫苗的亲本毒株。

manbet手机版就在猴子被发现易感后不久，在寻找一种更便宜、更容易获得的实验动物时，我发现普通的白鼠如果通过脑内途径接种，就会对病毒易感。manbet手机版之所以选择这种接种方法，是因为人们普遍承认，如果用通常的方法接种普通实验动物，就不会感染。manbet手机版进行这项工作的病毒株是由Mathis, Sellards和Laigret于1928年在法属西非达喀尔分离出来的，被称为法国株，和Asibi一样，对恒河猴具有高度毒性。manbet手机版小鼠的疾病是一种脑脊髓炎，不累及内脏器官，而人和猴的疾病则累及肝脏、肾脏和心脏。manbet手机版通过在小鼠体内的连续传代，该病毒的致病作用在两个方面发生了改变。manbet手机版首先，潜伏期逐渐缩短，经过多次传代后，潜伏期变得恒定，或者用巴斯德在他的狂犬病研究中引入的术语来说，潜伏期变得固定。manbet手机版现在，小鼠的潜伏期被用来衡量这些动物的神经嗜性程度。manbet手机版其次，随着对小鼠神经系统毒性的增加，也有证据表明，静脉接种对恒河猴的毒性逐渐减弱。manbet手机版这种对猴子毒力的丧失首次提示了使用减毒活性病毒对人类免疫的可能性。manbet手机版我发现黄热病病毒的毒力可以通过小鼠大脑通道改变，这一发现促使我对不同实验室程序引起的病毒变异进行了广泛研究，这成为我几年来的主要科学活动。 The results of only those experiments which are pertinent to the development of vaccines will be discussed here.

manbet手机版老鼠的易感性和猴子的易感性衰减的发现很快得到其他人的证实。manbet手机版研究表明，许多(如果不是全部的话)黄热病毒株对小鼠具有致病性，这种动物在所有黄热病工作中得到广泛使用。manbet手机版未经修饰的毒株对小鼠的致病性差异很大——从高度嗜神经的阿西比病毒到相对无毒的法国毒株。manbet手机版如前所述，这两种病毒对恒河猴来说都是高致病性的，而且在静脉接种时几乎无一例外地会产生致命的疾病。manbet手机版对于大多数毒株，小鼠可用于病毒的定量估计。manbet手机版这被证明具有巨大的价值，因为随着对猴子无毒的病毒株被开发出来，老鼠是唯一可以轻易确定病毒存在和数量的动物。

manbet手机版在我的早期工作中，已经清楚地表明，可以用小鼠来确定血清中黄热病抗体的存在。manbet手机版索耶和劳埃德以及我自己很快就发明了利用这些动物进行抗体标准化测试的方法。manbet手机版事实证明，这对研究黄热病的流行病学和分布，并最终在测试不同疫苗的效力方面具有重大价值。

manbet手机版在考虑使用经改良的适应于老鼠的病毒进行人类免疫的可能性时，虽然经非肠道途径接种后，该病毒对猴子的毒性明显减弱，但塞拉兹、劳埃德和彭纳发现，该病毒对这些动物具有显著的嗜神经亲和性，并在接种到它们的大脑时产生致命的脑炎。manbet手机版因此，这种病毒如果用作疫苗，虽然它已经失去了引起严重内脏疾病的能力，但仍有可能引起神经系统感染。manbet手机版这种可能性的原因在猴子身上的实验中得到了清楚的证明。manbet手机版当这些动物皮下接种老鼠适应病毒时，它们通常保持良好，并对随后接种的高毒力菌株产生了坚实的免疫力。manbet手机版接种经改造的病毒可产生轻微的全身感染，并产生特异性抗体;manbet手机版事实上，它就像疫苗一样。manbet手机版然而，偶尔有一只动物在全身感染结束后，就会患上脑炎，这种病总是致命的。manbet手机版这种脑炎是由适应老鼠的黄热病病毒引起的。

manbet手机版在开发人类疫苗的过程中，使用我的老鼠适应性病毒，有两条路可走。manbet手机版第一种主要由法国工人使用，只接种病毒;manbet手机版第二种是美国和英国工人使用的，病毒和人免疫血清同时接种。manbet手机版Sellard和Laigret(1932)报道了首次使用小鼠适应性嗜神经病毒对人类进行免疫。manbet手机版有几次严重的反应被报道，赖格雷对这种方法进行了修改，他介绍了一种程序，即每隔20天接种三次病毒，这些病毒分别暴露在20℃的温度下4天、2天和1天。这种方法基本上包括接种三种不同剂量的完全毒力的嗜神经病毒，而不是赖格雷认为的减毒病毒，惠特曼和我证明了这一点。manbet手机版这些早期疫苗仅使用神经适应病毒，虽然产生令人满意的免疫力，但由于在某些情况下与中枢神经系统受累迹象相关的严重反应，因此被认为不是完全安全的。manbet手机版然而，法国工作人员的进一步调查最终导致了一种安全有效的疫苗接种方法，目前在非洲的法属领土上大规模使用。manbet手机版Peltier和他的同事(1939)介绍的这种方法包括将小鼠适应的病毒应用于擦伤的皮肤。manbet手机版回顾起来，早期的严重反应似乎很可能是由于使用了一种病毒，这种病毒虽然经过了相当程度的改造，但仍没有足够的减毒能力，不能安全用于人。manbet手机版目前这种疫苗接种方法通常与牛痘病毒相结合。 A mixture of both viruses is applied to the scarified skin, and the individual is thus immunized to the two agents at the same time. Many millions of people have been immunized thus without any very serious reactions having been reported.

manbet手机版另一种早期使用鼠适应病毒的疫苗接种方法是同时接种病毒和人免疫血清。manbet手机版这种方法是根据高毒力黄热病病毒和免疫血清同时接种猴子容易产生主动免疫的观察得出的。manbet手机版在使用老鼠适应病毒和免疫血清在猴子身上进行了广泛实验后，Sawyer、Kitchen和Lloyd将这种方法引入了黄热病病毒工作人员的免疫，从而结束了造成如此严重伤亡的漫长的一系列实验室感染。manbet手机版尽管对疫苗的反应一般都很轻微，但应该指出的是，在单独使用该病毒后，发生了一次非常严重的反应，有脑部受累的迹象，就像法国工人报告的那样。manbet手机版然而，这种方法有一个非常严重的缺点，因为它需要大量的人免疫血清，不能大规模使用。

manbet手机版因此进行了调查，一方面寻找人类免疫血清的替代品，另一方面研制一种毒性更弱的病毒株。manbet手机版第一个很容易实现，不同的工人成功地生产出高滴度的马、兔、山羊和猴子免疫血清。manbet手机版惠特曼和我在猴子身上进行的实验表明，通过使用高免疫血清，用于人类疫苗接种的数量可以大大减少。manbet手机版在高免疫血清中，史密斯和我在猴子身上生产的血清被证明是最令人满意的，并在一段时间内被相当广泛地使用。manbet手机版反应少且温和，抗体产生令人满意。manbet手机版然而，主要的优势仅仅在于，每个人接种疫苗只需要几立方厘米，而以前需要35到40毫升的人血清。manbet手机版这种方法仍然很麻烦，对大规模免疫完全不切实际。manbet手机版这已成为一个紧迫的问题，因为已经发现了被称为“丛林黄热病”的流行病学实体。manbet手机版典型的城市黄热病，由普通的黄热病蚊子传播，manbet手机版埃及伊蚊manbet手机版蚊患，可透过防蚊措施控制。manbet手机版另一方面，丛林黄热病发生在农村地区，有时大规模流行，有时在没有疫情的情况下manbet手机版埃及伊蚊manbet手机版．manbet手机版保护受感染人群的唯一合理方法是大规模接种疫苗。

manbet手机版为了进一步尝试减弱黄热病病毒，研究了组织培养的方法。manbet手机版法国嗜神经病毒的培养很容易由哈根和我完成，后来由劳埃德、里奇和我利用鸡胚组织完成。manbet手机版在各种培养基中对这种病毒株进行了数年的广泛实验，没有导致任何进一步的衰减。manbet手机版在试图培养一种不适应的病毒株时，遇到了很大的困难，但这最终由劳埃德、利玛窦和我使用一种液体介质实现了，这种液体介质的组织成分由切碎的小鼠胚胎组织组成。manbet手机版在这种培养基中长期培养亚西比病毒，其毒力发生了显著变化;manbet手机版事实上，它的毒性变得如此之弱，以至于当注射到猴子体内时，它不再会导致死亡。manbet手机版同样重要的是，培养的病毒并没有变得更嗜神经;manbet手机版事实上，它对实验动物的嗜神经性不如当时用于人类疫苗接种的适应老鼠的法国病毒。manbet手机版然而，人们认为，如果不同时接种免疫血清，这两种特性的减毒程度还不足以单独用于人免疫。manbet手机版这种培养的病毒，被称为17E，因此被Lloyd取代了法国嗜神经病毒。 This method proved satisfactory.

manbet手机版在培养实验中，试图在尽可能广泛的各种组织中传播病毒，希望在一种组织中实现对嗜内脏性和嗜神经性的期望衰减。manbet手机版虽然很明显，通过小鼠脑传代或延长组织培养可以很容易地降低嗜内脏性，但特别需要的是一种降低嗜神经性的方法。manbet手机版由于病毒在脑组织中长时间保存(如在小鼠体内传代)后会变得更亲神经，如果在没有神经组织的情况下培养，它可能会失去这种亲和力，根据这一理论，进行了实验，以确定神经组织对病毒长时间培养的影响。manbet手机版为此，维持了三个平行系列的组织培养，均含有鸡胚组织，但神经组织的数量不同。manbet手机版在第一种方法中，组织成分包括切碎的整个鸡胚;manbet手机版第二种方法仅使用鸡胚脑;manbet手机版而第三组含有极少量的神经组织，由切碎的鸡胚组成，鸡胚的大脑和脊髓在切碎前被切掉了。

manbet手机版所有这些培养实验所使用的亚西比病毒是高致病性的，不仅通过注射接种对猴子具有高致病性，而且通过脑内接种对小鼠也具有高致病性;manbet手机版也就是说，它的嗜内脏性和嗜神经性是高度发达的。manbet手机版这些特性使其适合于培养实验，因为任何诱导的变化都可以很容易地确定。manbet手机版迄今为止的培养实验表明，Asibi菌株的嗜内脏亲和力可以很容易地降低，而不会同时产生嗜神经亲和力的变化。manbet手机版由于在自然界中出现的黄热病病毒株在这两种属性上差异很大，因此有理由认为，如果培养亲和力不那么明显的菌株，那么可能会发生所需的衰减。manbet手机版许多培养嗜内脏性或嗜神经性低的黄热病病毒株的尝试最初以失败告终。manbet手机版然而，我和史密斯最终取得了成功。manbet手机版实验表明，当子宫内的胚胎小鼠接种黄热病时，病毒对大脑有偏好。manbet手机版以小鼠胚脑为组织成分，快速培养出7株不同的黄热病菌株。manbet手机版其中只有两种，未改良的法国菌株和JSS，一种从丛林黄热病病例中分离出来的菌株，得到了广泛的研究。 After their establishment in this medium, the possibility of cultivating them in other tissues was investigated. At first these attempts were unsuccessful, but eventually cultures were obtained in a medium containing minced whole-mouse embryo and finally in media containing chick embryo tissue prepared either from whole embryos or from embryos from which the central nervous system had been cut away before mincing. Three parallel series of cultures were maintained for several hundred subcultures of these two strains of virus, the tissue components of the cultures being, respectively, mouse embryo brain, minced whole-chick embryo, and chick embryos from which the central nervous system had been cut away before mincing. We thus had three different yellow fever strains (the Asibi, the unmodified French, and the JSS) of widely divergent tissue affinities running concurrently in several media containing varying amounts of nervous tissue.

manbet手机版在这些新的培养实验取得很大进展之前，在培养基中培养的Asibi病毒的致病性发生了非常显著的变化，该培养基的组织成分是含有少量神经组织的鸡胚。manbet手机版这被称为17D菌株。manbet手机版这种衰减包括小鼠和猴子的部分神经趋向性丧失，以及猴子的内脏趋向性显著丧失。manbet手机版猴子在脑内接种后会出现轻度脑炎，通常不会致命。manbet手机版这是人们所希望的变化，因为当时用于人类免疫的两种毒株，即法国嗜神经病毒和在小鼠胚胎组织中培养的Asibi病毒的17E变体，在接种到恒河猴的大脑时，无一例外地产生致命的脑炎。

manbet手机版17D培养病毒的嗜内脏性明显丧失，在猴子身上的实验中清楚地显示出来。manbet手机版通常情况下，通过神经外途径接种病毒的猴子不会出现发烧或其他疾病症状，而且在它们的血液中只能显示出极少量的病毒。manbet手机版研究显示，这些猴子产生了特定的抗体，并对高毒性的亚西比病毒株具有坚实的免疫力。

manbet手机版在史密斯和我在猴子身上进行了大量实验后，17D菌株被用于人类疫苗接种，而无需同时接种免疫血清。manbet手机版人们认为，在猴子身上显示的嗜内脏性和嗜神经性的丧失使该病毒成为人类疫苗接种的首选病毒。manbet手机版在一项初步研究中，我们发现在人体内没有反应或反应很小，并且获得了令人满意的抗体反应。manbet手机版在巴西，史密斯、彭纳和保列洛对人类的反应进行了更彻底、更广泛的研究。manbet手机版结果非常令人满意。manbet手机版17D病毒已被用作数百万人的疫苗。

manbet手机版在两个平行的Asibi病毒培养系列中，仅使用整个鸡组织和鸡胚脑，没有出现这种明显的衰减。manbet手机版这两种病毒经过数百次传代培养后，在猴子脑内接种时产生致命的脑炎，并产生相当严重的内脏感染。manbet手机版这些结果表明，神经组织的数量是产生这种变化的条件因素，因为只有在含有少量神经组织的培养基中才会发生嗜神经性的丧失。manbet手机版当时，人们认为这些发现证实了培养实验所计划的假设。

manbet手机版因此，为了获得更多关于神经组织作用的信息，我开始了三个新的组织培养系列。manbet手机版从仅在鸡脑中培养的培养物系列中提取的病毒和在鸡全胚中培养的病毒在两个新的培养物系列中培养，其中组织成分含有少量的神经组织;manbet手机版相反，在含有少量神经组织的培养基中生长的17D病毒，被转移到只含有鸡胚大脑的培养基中。manbet手机版在实验结束时，新系列已进行了200多个亚培养。manbet手机版每隔一段时间，猴子脑内接种，以确定培养病毒的神经嗜性。manbet手机版结果表明，未发生任何修饰。manbet手机版因此，在鸡胚脑中培养了200多次的17D菌株并没有变得更嗜神经，并且该系列开始和结束时的病毒在致病性上基本相同。manbet手机版同样地，另外两种菌株，在这些培养实验开始时，会在猴子中产生致命的脑炎，即使在含有少量神经组织的培养基中维持了200多次传代，也没有失去它们的嗜神经性。manbet手机版结论很明显，神经组织在中膜的相对数量没有产生任何明显的变化。

manbet手机版17D菌株发生在第89次和第114次亚培养之间，其迅速变化的原因过去和现在都是完全未知的。manbet手机版然而，这些实验表明，一旦突变发生，它是相对稳定的。

manbet手机版Penna和Moussatché(1939)随后报道了一个明显相似的突变体。manbet手机版这些工作人员在发育中的小鸡胚胎中保持了亚西比病毒的序列，并注意到类似的显著衰减。manbet手机版在他们的实验中，尽管在发育中的鸡胚中，病毒对大脑表现出明显的亲和性，并且很容易在大脑中繁殖，但神经嗜性明显丧失。

manbet手机版我们在组织培养中对亚西比病毒的实验可以总结如下。manbet手机版突变:在一系列培养中突然发生的变异manbet手机版发生。manbet手机版证据表明，这种变化不是由于培养基中神经组织的相对缺失，鸡胚组织也不是manbet手机版本身manbet手机版这种变化只发生在含有鸡胚组织的六个系列培养物中的一个。

manbet手机版在含有不同数量神经组织的培养基中培养的另外两种黄热病菌株，法国菌株和JSS菌株的结果简要如下。manbet手机版法国嗜内脏病毒在三种不同的培养基中进行了数百次传代培养，其组织成分分别由小鼠胚脑、切碎的全鸡胚和含有少量神经组织的切碎的鸡胚组成。manbet手机版结果表明，该病毒的嗜内脏性迅速消失，但没有17D病毒那样的极端衰减。manbet手机版相反，在所有三种平行培养中，神经嗜性似乎都发生了实际的增加，而与培养基中神经组织的数量无关。

manbet手机版在JSS菌株的培养实验中，在与法国病毒相同的培养基中维持了300多次亚培养，在所有三个系列中，嗜神经性趋于下降。manbet手机版然而，在含有少量神经组织的培养基中培养的病毒，观察到的下降最少。manbet手机版在含有切碎的全鸡组织的培养基中生长的病毒的嗜内脏性变得如此之低，以至于在皮下接种时即使大剂量给药也不能产生感染。manbet手机版这是迄今为止在任何黄热病病毒中观察到的最极端的衰减情况。manbet手机版这种高度减毒菌株对皮下接种的猴子的传染性丧失，让人想起在17D培养系列中发生的某种类似的变化，尽管没有那么明显，17D培养系列对人的减毒程度如此之低，以至于在相当一部分病例中未能产生免疫。

manbet手机版总之，我们可以这样总结培养实验:在组织培养中保存的任何黄热病病毒的嗜内脏性都会有所减弱，而与所使用的组织无关。manbet手机版嗜神经亲和性通常不会改变。manbet手机版然而，由于某些未知的原因，偶尔会出现嗜神经性和嗜内脏性显著降低的突变体。manbet手机版这个突变体是相对稳定的，但它也被观察到经历了两次变化。manbet手机版第一次，正如索珀和史密斯所报告的，培养的病毒被发现毒性减弱，以至于在相当一部分接种者中不能产生免疫力;第二次，福克斯和他的同事注意到，病毒重新获得了一些神经嗜性，因此它实际上在一小部分接种者中产生了脑炎。

manbet手机版在比较目前使用的两种疫苗，即法国疫苗和17D疫苗时，可以指出，这两种疫苗都能产生实际感染和由此产生的免疫。manbet手机版法国疫苗产生的感染比17D疫苗产生的感染更严重，这从主观症状和传播病毒的数量上都可以表现出来。manbet手机版由于法国疫苗引起的这种相对严重的感染，抗体产生比17D疫苗引起的极其轻微的感染更有规律。manbet手机版只有时间才能告诉我们两者孰优孰劣。

manbet手机版通过明智地应用除蚊措施和接种疫苗，公共卫生官员现在有了可用的手段，使曾经流行的流行病变成了现在相对罕见的人类感染。